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學(xué)雷鋒計(jì)劃范文第1篇

一、做好學(xué)雷鋒活動(dòng)的動(dòng)員工作，向全體學(xué)生發(fā)出倡議書。1、3月1日利用周一升旗儀式時(shí)間向全體師生講述雷鋒同志的生平事跡并發(fā)出“向雷鋒同志學(xué)習(xí)，積極參加青年志愿者活動(dòng)”的倡議書。2、各班團(tuán)支書主持召開一次以學(xué)雷鋒活動(dòng)為主要內(nèi)容的主題班會(huì)，寫好本班活動(dòng)計(jì)劃。3、確定本鎰活動(dòng)的主題為“讓雷鋒的重任在我們身上延續(xù)，讓雷鋒的熱血在我們身上沸騰”。

二、積極開展學(xué)雷鋒活動(dòng)，把此項(xiàng)工作真正落到實(shí)處。1、把三月份作為我校學(xué)雷鋒活動(dòng)月，第二周為活動(dòng)周。2、開展“做文明市民”活動(dòng)，3月20日組織初一學(xué)生到雙臺(tái)子區(qū)主要街道清理白色垃圾。3、開展“為社會(huì)獻(xiàn)愛心”活動(dòng)，動(dòng)員同學(xué)們?yōu)榫蠢显旱墓鹿牙先司杩?每人2元)，為老人們奉獻(xiàn)一點(diǎn)愛心。4、3月13日副食優(yōu)秀學(xué)生干部和文藝骨干到陸家敬老院探望孤寡老人并帶云慰問品和一聲精彩的文藝節(jié)目。5、要求每位同學(xué)至少為社會(huì)為學(xué)校做一件好事。

三、召開總結(jié)表彰大會(huì)，對(duì)活動(dòng)期間涌現(xiàn)的好人好事進(jìn)行總結(jié)和表彰。1、3月末各班把活動(dòng)月期間出現(xiàn)的典型人物和先進(jìn)事跡材料上報(bào)到團(tuán)委。2、4月初召開全校學(xué)雷鋒活動(dòng)總結(jié)表彰大

學(xué)雷鋒計(jì)劃范文第2篇

2·在家中和學(xué)校把舊、廢報(bào)紙雜志、空瓶子等回收，賣給垃圾站，所獲錢捐給福利院等慈善機(jī)構(gòu)。

3·用自己的行動(dòng)來演繹雷峰事跡。

4.朗誦雷鋒光輝事跡和精神。

5·看有關(guān)雷峰的書，如：《雷鋒日記》，《雷鋒的故事》，并寫出讀后感。

6·幫助我們班的唐澤方，張紀(jì)龍等。

7·把貼在公共場(chǎng)所的小廣告都撕掉。

8·開展以學(xué)習(xí)雷峰的主題班會(huì)。

9·學(xué)習(xí)雷鋒的自力更生。

10·做好事后開展一個(gè)班會(huì)，來討論最近做好事的感受，并寫出感受作文。

11·組織一些同學(xué)到附近的社區(qū)去義務(wù)勞動(dòng)。

12·利用周末時(shí)間和節(jié)假日去看望，慰問空巢老人。

13·謙讓低年級(jí)的學(xué)弟學(xué)妹，如有發(fā)現(xiàn)隨意扔垃圾，打架等不良行為，應(yīng)加以勸阻并對(duì)其進(jìn)行教育。

14·好好學(xué)習(xí)，養(yǎng)成愛看書，看好事的習(xí)慣。

15·自己約束自己，犯錯(cuò)了學(xué)會(huì)自我批評(píng)。

學(xué)雷鋒計(jì)劃范文第3篇

關(guān)鍵詞：中華蜂；種群萎縮；文化生態(tài)共同體

中圖分類號(hào)：Q988 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-621X（2012）03-0002-06

中華蜂，又稱中華蜜蜂、中蜂、土蜂，是東方蜜蜂的一個(gè)亞種，也是我國土生土長的蜂種。在動(dòng)物界的分類中中華蜂屬于節(jié)肢動(dòng)物門昆蟲綱膜翅目細(xì)腰亞目蜜蜂科蜜蜂屬東方蜜蜂種。其主要生物特性為：蜂群由工蜂、蜂王、雄蜂3種個(gè)體組成，其中絕大部分是工蜂，每群只有1個(gè)蜂王及少數(shù)雄蜂。中華蜂軀體較小，一般來說，工蜂體長1013mm，雄蜂體長約1113mm，蜂王體長1316mm。頭胸部黑色，腹部黃黑色，全身被黃褐色絨毛。工蜂在氣溫7℃左右就能進(jìn)行采蜜采粉活動(dòng)，因而屬于較為耐寒的蜂種，能夠在我國廣大寒冷的地帶正常生存，為植物承擔(dān)授粉作用。中華蜂的安全采蜜氣溫為65℃，在這一氣溫之上的環(huán)境采蜜不會(huì)導(dǎo)致個(gè)體傷亡，而意大利蜂的安全采蜜溫度為11℃以上[1]，因而秋冬和初春開花的植物意大利蜂無法授粉，只能仰仗中華蜂授粉?？傮w而言，中華蜂耐寒、耐熱，因而在中國大地上正常采蜜期很長，長江以南每年的正常采蜜期300天以上，即使是寒冷的東北地區(qū)，可以正常采蜜的時(shí)間也長達(dá)200天左右。此外，中華蜂對(duì)養(yǎng)蜂業(yè)危害嚴(yán)重的蜂螨具有天然的抗異能力，選用中華蜂為飼養(yǎng)蜂種，一般不會(huì)招致蜂螨泛濫的危害。中華蜂采蜜時(shí)飛行敏捷、嗅覺靈敏，特別是對(duì)中國本土顯花植物的氣息極為敏感，無論是多么分散，花型多么不顯眼，中華蜂都能準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)并能盡其可能采獲蜜源和粉源，這一生物屬性不僅能確保養(yǎng)蜂業(yè)的高產(chǎn)和豐產(chǎn)，還能為我國數(shù)萬種顯花植物的正常繁殖提供充分的保障。

一、中華蜂種群萎縮的歷史回顧

據(jù)地質(zhì)考古提供的證據(jù)表明，蜜蜂在地球上的出現(xiàn)可以上溯到7000萬年以前，其主要依據(jù)是當(dāng)時(shí)地球上已經(jīng)出現(xiàn)了顯花植物，因而作為與顯花植物共生的蜜蜂，也應(yīng)當(dāng)在這個(gè)時(shí)候出現(xiàn)。1983年在山東省萊陽市北泊子與臨朐縣山旺2處的地質(zhì)考古發(fā)掘中[2]，都發(fā)現(xiàn)了中華蜂的化石，足以證實(shí)2000萬年前中國東部溫帶區(qū)域已經(jīng)有中華蜂正常繁殖與生存。養(yǎng)蜂業(yè)在我國是一項(xiàng)歷史悠久的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，原始的養(yǎng)蜂可以追溯到舊石器時(shí)代對(duì)野生中華蜂蜂蜜的采集。公元前1611世紀(jì)殷商甲骨文中就有“蜜”字的記載，說明中國養(yǎng)蜂業(yè)至少已有3000多年歷史。中華民族將野生中華蜂逐步飼養(yǎng)為家養(yǎng)中華蜂，經(jīng)歷了原始采集蜂蜜階段、采集整群中華蜂安置在居住區(qū)附近飼養(yǎng)階段，最后才發(fā)展成徹底飼養(yǎng)中華蜂的養(yǎng)蜂業(yè)的階段。最后一個(gè)階段才是真正意義上的養(yǎng)蜂業(yè)。據(jù)記載，公元14世紀(jì)就已出現(xiàn)專門飼養(yǎng)中華蜂的專業(yè)人戶，標(biāo)志著養(yǎng)蜂業(yè)從副業(yè)發(fā)展成獨(dú)立的產(chǎn)業(yè)。在漫長的歲月里，隨著社會(huì)生產(chǎn)力的提高和科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，逐漸形成了中華蜜蜂的傳統(tǒng)養(yǎng)殖規(guī)范，這樣的規(guī)范在中國各民族中雖然小有差異，但總體而言，都能較好的適應(yīng)中華蜂的生物特點(diǎn)，同時(shí)又能為中國各民族提供高品質(zhì)的營養(yǎng)食品和工業(yè)原料，如蜂蠟、蜂膠等。

我國自1896年開始引進(jìn)西方蜜蜂的優(yōu)良品種，如意大利蜂、喀尼阿蘭蜂等等，當(dāng)時(shí)中國由于遭受帝國主義列強(qiáng)的欺凌，正在倡導(dǎo)，希望發(fā)展實(shí)業(yè)，拯救中華。鑒于中國養(yǎng)蜂專業(yè)水平不高，在國民經(jīng)濟(jì)中所做的貢獻(xiàn)極為低下，僅僅考慮到歐洲養(yǎng)蜂業(yè)所用的蜂種個(gè)體大，采蜜能力強(qiáng)，而且可以通過半機(jī)械化操作采蜜取蜜，因而當(dāng)時(shí)的學(xué)者熱衷于引進(jìn)和推薦外來蜂種，希望借此推動(dòng)中國養(yǎng)蜂業(yè)的專業(yè)化，提高其在國民經(jīng)濟(jì)中的地位和價(jià)值。這樣的考慮在那個(gè)時(shí)代具有積極意義，無可厚非[3]。但是隨著時(shí)間的推移，在養(yǎng)蜂業(yè)獲利的同時(shí)，中國的生態(tài)安全卻蒙受了致命的打擊。在100多年的時(shí)間里，隨著意大利蜂等西方蜂群的無限膨脹，中華蜂因此蒙受了滅頂之災(zāi)。

在20世紀(jì)60年代以前，全國飼養(yǎng)的中華蜂總量一直保持在200萬群以上，而且還建立了不少中華蜂生產(chǎn)區(qū)。但是20世紀(jì)80年代以后，西蜂養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，在華北平原、江漢平原、長江中下游平原、東南丘陵，乃至四川盆地等低海拔地區(qū)，中華蜂已基本上或者完全被意大利蜂取代。上述地區(qū)的森林中甚至是極偏遠(yuǎn)的村落，當(dāng)前也很難找到野生中華蜂的蜂群。據(jù)《北京科技報(bào)》報(bào)道，僅北京地區(qū)的中華蜂數(shù)量就從20世紀(jì)50年代的4萬多群，減少到了現(xiàn)在的不足40群?？梢?，中華蜂種群數(shù)量和分布區(qū)域不斷萎縮，已經(jīng)到了瀕臨滅絕的地步。

二、中華蜂種群萎縮的原因

造成中華蜂瀕臨滅絕這一始料不及惡果的原因包括如下三個(gè)方面。

1.發(fā)生在意大利蜂與中華蜂之間的盜蜂行為。蜜蜂各種類都具有在蜂群間互相盜蜜的行為，稱為盜蜂行為。在蜜源植物開花后期，二者為爭奪貯藏在各自蜂巢內(nèi)的蜂蜜而進(jìn)行激烈斗爭，因意大利蜂體型較大，在競爭中占優(yōu)勢(shì)，中華蜂無法戰(zhàn)勝意大利蜂，結(jié)果往往是中華蜂蜂群“全軍”覆滅，從而導(dǎo)致在中華蜂與意大利蜂并行飼養(yǎng)的情況下，意大利蜂種群越來越大，而中華蜂種群越來越少，甚至因?yàn)楸I蜂，中華蜂種群被活活餓死。

2.意大利蜂還干擾中華蜂蜂王與雄蜂的自然。因?yàn)椴煌奈锓N存在種間生殖隔離，不能跨種。意大利蜂和中華蜂分屬不同的蜂種，他們之間不能正常繁殖后代。然后，在季節(jié)，由于意大利雄蜂飛翔能力強(qiáng)，體力也強(qiáng)，中華蜂體力跟不上意大利蜂，因而一旦中華蜂蜂王出巢，意大利蜂趕上，強(qiáng)行與中華蜂，使中華蜂蜂王失敗，產(chǎn)出的后代蜜蜂不具備生存能力和生育能力，因而二者不能跨種正常繁育后代。并且，由于中華蜂蜂王一生只能一次，一旦后就不能再了，但這樣產(chǎn)出的蜂卵繁育都不正常，結(jié)果導(dǎo)致該中華蜂群徹底死絕。生物生殖的種間隔離，在意大利蜂與中華蜂并存的情況下，成了滅絕中華蜂的頭等殺手。當(dāng)前中華蜂的急劇萎縮，這是最關(guān)鍵、危害最大、又無法直接保護(hù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

3.對(duì)意大利蜂的人為保護(hù)窒息了中華蜂的生機(jī)。對(duì)中國而言，包括意大利蜂在內(nèi)的各種西方蜂種，都是外來蜂種，在野生狀況下，他們的成活能力本來很低，對(duì)中華蜂生存根本不構(gòu)成威脅。但我們面臨的是經(jīng)濟(jì)效益極高的養(yǎng)蜂業(yè)，專業(yè)養(yǎng)蜂業(yè)的意大利蜂由于受到人為的幫助，氣候的變遷、蜂螨的威脅、蜜源的采集，都得到了養(yǎng)蜂戶和國家的資助和扶持，從而使得我國的養(yǎng)蜂業(yè)向意大利蜂這一單項(xiàng)蜂種轉(zhuǎn)變。在這樣的情況下，中華蜂受到了人為的窒息，結(jié)果導(dǎo)致意大利蜂蜂群惡性膨脹。這樣一來，表面上看似不同物種之間的競爭，實(shí)質(zhì)則是經(jīng)濟(jì)利益和生態(tài)效益的競爭，中華蜂種群萎縮僅僅是個(gè)表象而已。

三、中華蜂種群的生存現(xiàn)狀

當(dāng)前，中華蜂蜂群在我國大陸數(shù)量急劇減少。在未引進(jìn)西方蜜蜂之前，山林中野生蜂群密集，并且到處可見農(nóng)家傳統(tǒng)飼養(yǎng)的中華蜂群。此前，全國雖沒有確切的統(tǒng)計(jì)數(shù)字，但各地以蜜蜂為名的傳說、地名和集市很多，如蜂蜜營子、蜂蜜溝等，表明中華蜂種群眾多，分布遼闊，與中國各族人民的生活息息相關(guān)。經(jīng)20世紀(jì)30年代和60年代2次大力引進(jìn)和發(fā)展西方蜜蜂后，至1981年我國飼養(yǎng)的中華蜂已不足200萬群。華北平原和東北平原的中華蜂在20世紀(jì)80年代就已絕跡，在西北黃土高原的半耕半牧區(qū)，現(xiàn)在也難覓中華蜂足跡，甘肅寧縣、鎮(zhèn)原、西峰等地及寧夏、陜西等農(nóng)耕區(qū)20世紀(jì)末期中華蜂就已消亡了。目前，黃河以北地區(qū)，只有一些山區(qū)還有少量中華蜂，長白山區(qū)、太行山區(qū)、燕山山區(qū)、呂梁山區(qū)等，即使在這樣的地區(qū)，中華蜂也處于瀕危狀態(tài)，蜂群數(shù)量比20世紀(jì)初減少了95%以上。20世紀(jì)90年代長江流域的平原地區(qū)中華蜂已滅絕，周邊的丘陵山區(qū)中華蜂已經(jīng)處于瀕臨滅絕狀態(tài)。遠(yuǎn)在大山區(qū)的神農(nóng)架山區(qū)、秦嶺、大別山區(qū)、武夷山區(qū)、浙江南部，湖南南部，江西東部、南部山區(qū)、南嶺山區(qū)，目前雖有少量中華蜂殘存，但生存狀況不佳，已經(jīng)成為稀有狀態(tài)，蜂群數(shù)量與20世紀(jì)初相比，已經(jīng)減少了60%以上。只有在云南怒江流域、四川西部、還有自然生存狀態(tài)的野生中華蜂[4]。目前，我國飼養(yǎng)的中華蜂僅有70100萬群，其分布極為零碎，正常繁育已經(jīng)受到了致命威脅。與西方蜜蜂當(dāng)前在我國（除自治區(qū)）的蜂群擁有量卻高達(dá)群數(shù)500萬群比較，100萬種群的中華蜂種群作為本土物種，在其間表現(xiàn)出來的劣勢(shì)已明顯可見，長此下去，不出20年，如果不加以積極搶救，中華蜂將進(jìn)入滅絕物種的“紅皮書”。2006年6月2日，中華人民共和國農(nóng)業(yè)部第662號(hào)公告《國家級(jí)禽畜遺傳資源保護(hù)品種名錄》公布的138個(gè)禽畜品種里，中華蜂被列入第七類“其他品種”中。這一文件，以官方的名義，證實(shí)了中華蜂瀕臨滅絕這一可怕的事實(shí)。

與此同時(shí)，中華蜂分布區(qū)域也在全國范圍內(nèi)迅速銳減。歷史上，對(duì)中華蜂的分布及范圍雖然沒有詳細(xì)的統(tǒng)計(jì)和記載，但傳統(tǒng)中醫(yī)藥材中都必須使用中華蜂產(chǎn)品。各地傳統(tǒng)飼養(yǎng)在木桶、竹簍和樹干等半野生狀態(tài)的中華蜂群與野生中華蜂群并存，互為蜂源，在全國呈呈現(xiàn)為成片集群分布狀況。但是，當(dāng)前根據(jù)有關(guān)專家對(duì)全國中華蜂調(diào)查表明：中華蜂在新疆和大興安嶺地區(qū)已滅絕，東北平原、華北平原已很少有農(nóng)民傳統(tǒng)飼養(yǎng)的中蜂，整個(gè)北方中蜂分布只限山區(qū)及部分半山區(qū)，長江流域的平原區(qū)飼養(yǎng)的中華蜂已蕩然無存，僅是在我國的西南山區(qū)還有相當(dāng)一部分農(nóng)戶延續(xù)傳統(tǒng)辦法飼養(yǎng)中華蜂。

至于野生狀況的中華蜂更堪憂。我國廣大西北地區(qū)的草原，由于地廣人稀，生態(tài)安全的維護(hù)主要仰仗野生中華蜂這一關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但正是在這一廣大地區(qū)，野生中華蜂也因?yàn)橥鈦矸浞N的干擾而完全絕跡。當(dāng)前，我國政府出臺(tái)了各種政策，大力恢復(fù)西北地區(qū)受損的生態(tài)系統(tǒng)，但這些決策主要是關(guān)注技術(shù)層面、工程層面的對(duì)策，很少有人提到野生中華蜂的存滅對(duì)這一地區(qū)生態(tài)恢復(fù)的決定性作用。由于草原上的很多牧草、灌木和喬木只能靠中華蜂傳粉，野生中華蜂一旦缺位，人工飼養(yǎng)的蜂群又難以足夠量的進(jìn)入草原，最終將是我們耗費(fèi)巨資興建的治理工程以及成套的技術(shù)根本無法發(fā)揮效益。具體表現(xiàn)為撒下的草種不能夠繁殖，防護(hù)林不能自行擴(kuò)大，在如此遼闊的干旱地區(qū)，靠人力去完成將是巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)荷。

針對(duì)中華蜂的瀕?，F(xiàn)狀，國內(nèi)許多專家提倡建立中華蜂種群保護(hù)區(qū)，如北京市在房山區(qū)建立了中華蜂自然保護(hù)區(qū)，中國科學(xué)院在遼寧省營口市建立了一個(gè)國家級(jí)的中華蜂保種區(qū)，重慶市建立了一個(gè)中華蜂保種基地，吉首大學(xué)與貴州省農(nóng)科院在貴州省麻山地區(qū)建立了一個(gè)中華蜂的保種基地，但保護(hù)區(qū)的數(shù)量還很少。這些保護(hù)基地的興建，從好的方面看，有助于搶救中華蜂種群，也可以通過這樣的形式，向舉國上下喚醒對(duì)中華蜂種群現(xiàn)狀的關(guān)注。不足之處在于，在如此遼闊的中國大陸建立的養(yǎng)蜂基地，卻如同鳳毛麟角，遠(yuǎn)遠(yuǎn)跟不上中華蜂保種的實(shí)際需要。更重要的是，建基地只能治標(biāo)不能治本，特別是我國的經(jīng)濟(jì)部門，處于短期經(jīng)濟(jì)利益的考慮，至今尚未推出抑制外來蜂生物污染的政策，僅僅在小范圍內(nèi)延續(xù)中華蜂種群，根本無助于中國生態(tài)危機(jī)的緩解。為此，必須向公眾澄清中華蜂存廢的生態(tài)價(jià)值，進(jìn)一步推動(dòng)相關(guān)政策的出臺(tái)，中國的生態(tài)安全才得到起碼的保障。

四、中華蜂的生態(tài)價(jià)值

學(xué)雷鋒計(jì)劃范文第4篇

【摘要】 目的 探討急性腦血管病患者應(yīng)激性高血糖、血清鉀、鈉、氯的變化及其與中風(fēng)類型、病情輕重、預(yù)后關(guān)系。方法 本文對(duì)我院神經(jīng)內(nèi)科2004年6月~2005年6月住院急性腦血管病患者248例進(jìn)行研究，其中出血性中風(fēng)89例，缺血性中風(fēng)159例，于入院次日晨檢測(cè)空腹血糖、血清鉀、鈉、氯，觀察血糖、血鈉、血氯、血鉀值的變化及其與腦卒中類型、病情輕重、預(yù)后關(guān)系。結(jié)果 （1）急性腦血管病患者易出現(xiàn)應(yīng)激性高血糖、低鈉血癥、低氯血癥、低鉀血癥；（2）出血性中風(fēng)血糖明顯高于缺血性中風(fēng)；高血糖組死亡率明顯高于非高血糖組；死亡組的血糖均值亦顯著高于存活組；統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性。（3）出血性中風(fēng)低血鈉、低血氯的發(fā)生率明顯高于缺血性中風(fēng)，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性；低血鈉、低血氯組中的中、重度患者顯著多于正常血鈉、血氯組；與正常血鈉、血氯組相比，高血鈉、高血氯組患者在中風(fēng)類型、病情輕重及預(yù)后方面差異均無顯著性，但血鈉、血氯顯著升高時(shí)，死亡率明顯增加。與正常血鉀組相比，低血鉀組中患者在中風(fēng)類型、病情及預(yù)后方面差異無顯著性，但血鉀明顯降低時(shí)，病死率增加。高血鉀組患者在中風(fēng)類型、病情輕重和正常血鉀組相比差異無顯著性，但病死率則明顯高于正常血鉀組。結(jié)論 急性腦血管病患者存在應(yīng)激反應(yīng)，急性腦血管病患者應(yīng)激性高血糖、低鈉血癥、低氯血癥可以作為判斷急性腦血管病病情、預(yù)后評(píng)估的指標(biāo)之一。高鈉血癥、高氯血癥、高鉀血癥、低鉀血癥與中風(fēng)類型、病情及預(yù)后方面差異無顯著性，但當(dāng)出現(xiàn)嚴(yán)重的高鈉血癥、高氯血癥、高鉀血癥、低鉀血癥時(shí)，病死率明顯增加。

【關(guān)鍵詞】 急性腦血管病；應(yīng)激性高血糖；血清鉀；血清鈉；血清氯

【Abstract】 Objective To explore the relationship between irritable hyperglycemia and the change of serum potassium，serum natrium，serum chloremia on stroke type，developing degree of stroke type，developing of illness and prognosis in ACVD. Methods We detected 4 indexes in 248 patients who suffered from ACVD in one week in our hospital from Jun 2004. to Jun 2005，including 89 cases were intracerebral hemorrhage and 159 cases were cerebral ischemia. The detected items include the fasting blood-glucose and fasting serum Na+，K+，Cl- next morning. To observe the relationship between irritable hypernatrium，hyponatremia，hypernatrium，hypokalemia，hyperkalemia，hypochloremia and hyperchloremia on stroke type，developing of illness and prognosis in ACVD. Results （1）The results showed that patients who involved in ACVD constantly turned up hyperglycemia，hyponatremia，hypochloremia，hyperkalemia. （2）The increasing level of blood-glucose was apparent in intracerebral hemorrhage compared with cerebral ischemia. The death rate in hyperglycemia apparently increased. The fasting blood-glucose markedly increased in dead index compared with survival index. There are significantly difference.（3）Hyponatremia，hypochloremia were related with stroke type，developing of illness and prognosis. Hyperkalemia，hypokalemia，hypernatrium and hyperchloremia had nothing to do with stroke type，developing of illness and prognosis. When the change of fasting serum Na+，K+，Cl- were markable.The death rate was apparently increasing too. Conclusion There really exist damage from stress reponse in ACVD，hyperglycemia，hyponatremia and hypochloremia are indicators of stroke type，developing of illness and prognosis. Hyperkalemia，hypokalemia，hypernatrium and hyperchloremia had nothing to do with stroke type，developing of illness and prognosis. When the change of fasting serum Na+，K+，Cl- were markable，but the death rate was apparently increasing .

【Key words】 acute cerebrovascular disease；irritable hyperglycemia；serum potassium；serum natrium；serum chlorine

腦血管病其發(fā)病率、患病率、死亡率均居神經(jīng)科各類疾病的首位，提高腦血管病的治愈率及存活率備受當(dāng)今臨床醫(yī)生的關(guān)注。臨床上急性腦血管病常有應(yīng)激反應(yīng)參與，且表現(xiàn)為機(jī)體應(yīng)激損傷加重病情發(fā)展，而高血糖是機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)的表現(xiàn)之一。國內(nèi)外文獻(xiàn)早有報(bào)道，急性腦血管病患者早期血糖水平增高者多預(yù)后不良，病死率高，影響近期預(yù)后［1~5］，及時(shí)糾正高血糖的同時(shí)能使腦卒中患者預(yù)后得到改善。急性腦血管病時(shí)血清鈉、氯、鉀紊亂是很常見的，也是應(yīng)激反應(yīng)之一，但國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道的并不多，且對(duì)病情預(yù)后的影響，文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果也不盡相同。本研究旨在探討急性腦血管病時(shí)應(yīng)激性高血糖及血清鉀、鈉、氯的變化與中風(fēng)類型、病情變化、預(yù)后關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 （1）病例選擇標(biāo)準(zhǔn)：本研究選取2004年6月~2005年6月在我院神經(jīng)內(nèi)科住院治療的急性腦血管病患者248例，男147例，女101例；年齡35~98歲，平均（63.6±4.71）歲。所有患者診斷符合下列條件：依據(jù)1995年第4屆全國腦血管疾病學(xué)術(shù)會(huì)議通過的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)顱腦CT或MRI證實(shí)；首次發(fā)病1周內(nèi)入院；無糖尿病病史，肝功、腎功能均正常。（2）按改良愛丁堡+斯堪的那維亞臨床神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)(入院后24h內(nèi)進(jìn)行)，將患者分為輕型(0~15分)112例，中型(16~30分)87例，重型(31~45分)49例。

1.2 病例分組 根據(jù)病例分組：出血性腦血管病89例，其中腦出血86例，蛛網(wǎng)膜下腔出血( SAH )2例，硬膜下出血1例。缺血性腦血管病159例，其中腦血栓形成104例，腦栓塞32例，腔隙性腦梗死23例。

1.3 標(biāo)本采集 所有符合條件的病例于入院次日晨空腹采取肱靜脈血4ml送檢血清鉀、鈉、氯及血糖。

1.4 結(jié)果判斷 空腹血糖＞6.1mmol/L為高血糖。電解質(zhì)紊亂診斷標(biāo)準(zhǔn)參照全國統(tǒng)一質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和《實(shí)用內(nèi)科學(xué)》(第10版)電解質(zhì)紊亂章節(jié)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 結(jié)果用（x±s）及例數(shù)表示，用t檢驗(yàn)、u檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)和精確概率進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 病情輕重與血糖含量檢測(cè)結(jié)果 見表1。

表1 病情輕重與血糖含量關(guān)系 （x±s）

注：中、重度組血糖較輕度組明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有非常顯著性（P＜0.01）

2.2 不同類型ACVD血糖含量檢測(cè)結(jié)果 見表2。

表2 不同類型ACVD血糖含量變化 （x±s）

注：出血組血糖較缺血組明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（P

2.3 不同類型急性腦血管病患者血糖水平檢測(cè)結(jié)果及死亡率 見表3。

2.4 ACVD患者血糖變化與轉(zhuǎn)歸 見表4。

2.5 血鈉與ACVD類型、病情輕重及預(yù)后關(guān)系 見表5。

2.6 血鉀與ACVD類型、病情輕重及預(yù)后關(guān)系 見表6。

2.7 血氯與ACVD類型、病情輕重及預(yù)后關(guān)系 見表7。

表3 不同類型急性腦血管病患者血糖水平與死亡率 （例）

注：高血糖組死亡率較非高血糖組比較統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有非常顯著性（*P

表4 ACVD患者血糖變化與轉(zhuǎn)歸 （x±s，mmol/L）

注：死亡組血糖與存活組比較明顯升高，統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（*P

3 討論

3.1 ACVD時(shí)應(yīng)激性高血糖 應(yīng)激反應(yīng)( SR )是機(jī)體的一種非特異性全身反應(yīng)，輕度SR有利于提高機(jī)體的適應(yīng)能力，而過度或持續(xù)的SR常導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)環(huán)境紊亂、損害加重。 本組研究結(jié)果表明：ACVD患者血糖明顯增高，應(yīng)激性高血糖發(fā)生率達(dá)42.34%；中、重度患者血糖較輕度組明顯增高；死亡組較存活組血糖均值明顯升高；高血糖組病死率為43.80%，非高血糖組病死率為12.59%，高血糖組病死

表5 血鈉與ACVD類型、病情輕重及預(yù)后關(guān)系 (例)

注：出血性中風(fēng)時(shí)低鈉血癥的發(fā)生率（20.22%）明顯高于缺血性中風(fēng)（14.47%），統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（1P

轉(zhuǎn)貼于

表6 血鉀與ACVD類型、病情輕重及預(yù)后關(guān)系 （例）

注：ACVD時(shí)易出現(xiàn)低鉀血癥；與正常血鉀組相比，低血鉀組在中風(fēng)類型、病情輕重、預(yù)后差異均無顯著性（P>0.05）；高血鉀組患者中風(fēng)類型、病情輕重與正常血鉀組相比差異無顯著性（P>0.05），但病死率則明顯高于正常組（P

表7 血氯與ACVD類型、病情輕重及預(yù)后關(guān)系 （例）

注：出血性中風(fēng)時(shí)低氯血癥的發(fā)生率（23.60%）明顯高于缺血性中風(fēng)（15.09%），統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性（1P

率高于非高血糖組病死率；出血性腦血管病組血糖明顯高于缺血性腦血管病組。

3.1.1 ACVD時(shí)導(dǎo)致血糖升高的依據(jù) （1）文獻(xiàn)報(bào)道［6］：ACVD時(shí)應(yīng)激狀態(tài)下刺激下丘腦—垂體—靶腺軸，引起兒茶酚胺( CA )、皮質(zhì)醇、胰高血糖素(GC )濃度明顯升高；這些激素均能促使糖原的異生和糖原的分解，使血糖升高。（2）胰島素抵抗與應(yīng)激性高血糖［7］：當(dāng)機(jī)體存在IR時(shí)，胰島素的生物效應(yīng)低于預(yù)計(jì)正常水平，血清胰島素( INS )水平代償性增高，胰島素受體下調(diào)，或數(shù)目減少或受體結(jié)構(gòu)功能異常，胰島素生理效應(yīng)降低，最終引起血糖升高。（3）有學(xué)者［6］提出高血糖可能是由于顱內(nèi)血腫、水腫等因素對(duì)下丘腦及垂體的刺激或損傷所引起的生長因子分泌增加，而生長激素對(duì)胰島素有拮抗作用，促進(jìn)脂肪分解，抑制葡萄糖利用，使血糖增高，或與下丘腦室旁核破壞，使血糖代謝紊亂有關(guān)。出血性腦血管病組血糖明顯高于缺血性腦血管病組，這可能是出血病變性質(zhì)比梗死更嚴(yán)重，起病更具突然性，因而更具應(yīng)激反應(yīng)性；病變程度重，病變范圍大，有中線偏移或出血破入腦室或腦室受壓的重型比輕型血糖升高明顯，提示應(yīng)激反應(yīng)更強(qiáng)烈。

3.1.2 高血糖者預(yù)后差的主要原因 （1）高血糖使細(xì)胞外液處于高滲狀態(tài)，會(huì)導(dǎo)致滲透性利尿，并出現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)脫水，其中神經(jīng)元脫水，腦組織血管內(nèi)皮細(xì)胞破壞，神經(jīng)髓鞘的斷裂及大腦黑質(zhì)的損傷會(huì)增加死亡的危險(xiǎn)性。高血糖癥增加ACVD患者葡萄糖無氧酵解底物，因血糖是乳酸的基質(zhì)，而使乳酸生成增多［8］，同時(shí)糖化血紅蛋白升高，抑制血紅蛋白對(duì)氧的釋放，加重了組織缺氧和酸中毒。本組顯示ACVD患者發(fā)生高血糖時(shí)易發(fā)生電解質(zhì)紊亂，加重了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的紊亂，從而使病情進(jìn)一步惡化。（2）高血糖還可抑制鎂在腎小管的吸收，使尿鎂排出過多，造成低鈣、低鎂血癥，低鈣、低鎂血癥是腦血管病的危險(xiǎn)因素［9］，鎂離子是維持正常神經(jīng)肌肉興奮性和細(xì)胞代謝不可缺少的因子之一，并作為鈣通道阻礙物［9］，在心臟和血管平滑肌的收縮中起媒介作用，應(yīng)激狀態(tài)細(xì)胞內(nèi)鈣超載，血清鈣降低，不利于腦缺血后早期灌流的鈣離子恢復(fù)，細(xì)胞內(nèi)鈣超負(fù)荷將引起細(xì)胞蛋白和脂質(zhì)代謝紊亂，干擾線粒體磷酸化過程，加重腦水腫，由于高血糖致高黏血癥，高滲和高代謝率，干擾局部腦血流的恢復(fù)，高血糖加劇自由基損傷，加重內(nèi)皮細(xì)胞水腫及膠質(zhì)細(xì)胞損害，使血腦屏障損害，加重腦損害，使病灶擴(kuò)大，死亡率增加。實(shí)驗(yàn)研究表明［7］，胰島素（INS）治療在急性腦梗死的療效觀察中既能降低血糖，又是一種缺血性腦損傷的神經(jīng)保護(hù)劑。

3.2 ACVD時(shí)血鈉、血氯的變化 ACVD時(shí)常出現(xiàn)血鈉、血氯紊亂，但文獻(xiàn)報(bào)道的并不多，且對(duì)預(yù)后的影響，文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果也不盡相同。我們的資料顯示，ACVD患者易出現(xiàn)低血鈉、低血氯，且低血鈉、低血氯的出現(xiàn)和中風(fēng)類型、病情輕重有關(guān)，出血性中風(fēng)及中、重癥者易出現(xiàn)低血鈉、低血氯，且低血鈉、低血氯者預(yù)后差。高血鈉和中風(fēng)類型、病情輕重、預(yù)后無關(guān)。但出現(xiàn)明顯高血鈉、高血氯時(shí)病死率明顯增加。

3.2.1 低血鈉、低血氯的產(chǎn)生原因 目前認(rèn)為低血鈉、低血氯的產(chǎn)生可能是因?yàn)榫S持機(jī)體水電解質(zhì)平衡的兩個(gè)內(nèi)分泌系間正常調(diào)節(jié)關(guān)系被破壞所致［10］，（1）腎素—血管緊張素-醛固酮及抗利尿激素（ADH）；（2）是利鈉因子，包括心鈉素［11］、內(nèi)源性洋地黃物質(zhì)［12］等。生理狀態(tài)下，ADH的分泌主要受血漿滲透壓的影響，以下丘腦滲透壓感受器作為介導(dǎo)，在ACVD時(shí)，由于直接或間接刺激丘腦下部的視上核及神經(jīng)垂體［13］，一方面引起ADH分泌異常，導(dǎo)致尿量減少，水潴留，細(xì)胞外液擴(kuò)張，血鈉、血氯降低，表現(xiàn)為抗利尿激素異常分泌綜合征（SIADH），另一方面，張永立等實(shí)驗(yàn)證實(shí)ACVD患者血漿中的心鈉素明顯增高，且腦出血組較腦梗死組增高明顯，并且心鈉素水平和中風(fēng)患者血漿鈉水平呈負(fù)相關(guān)。心鈉素等濃度增加，促進(jìn)鈉的排泄，導(dǎo)致失鈉性低鈉血癥，臨床表現(xiàn)為腦耗鹽綜合征 （CSWS）［13］。森永一生［11］通過 對(duì)蛛網(wǎng)膜下腔出血患者血清鈉、抗利尿激素和心鈉素的研究后認(rèn)為，蛛網(wǎng)膜下腔出血并發(fā)低鈉血癥的重要原因是ADH不適當(dāng)分泌，其他利尿、利鈉因子也應(yīng)該考慮。筆者認(rèn)為中、重型中風(fēng)患者腦水腫及顱內(nèi)壓增高明顯，引起下丘腦—垂體—腎上腺軸功能紊亂嚴(yán)重［11］，釋放更多ADH，易出現(xiàn)低鈉血癥，血清鈉降低使細(xì)胞外滲透壓低于細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞外液進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，加重腦水腫。另外，精神刺激、焦慮、恐懼等精神因素，對(duì)ADH的分泌起興奮作用，頻繁的嘔吐，過多使用利尿劑［11］等也是導(dǎo)致低血鈉、低血氯的常見原因。目前對(duì)高氯、低氯血癥的機(jī)制尚未完全明確，有待于進(jìn)一步探討。

3.2.2 高血鈉產(chǎn)生的機(jī)制［14］ ACVD時(shí)引起機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)，促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）明顯增高（10~20倍），通過興奮其周圍靶腺增加醛固酮的分泌而起滯鈉作用，促使血鈉與血滲透壓增高；其次反復(fù)作用滲透性利尿劑、高熱、嘔吐、出汗、過度換氣等造成水分丟失過多［15］，而腦血管病時(shí)往往損害下丘腦渴感中樞而致渴感消失，導(dǎo)致低血容量性高鈉血癥、高氯血癥，治療中過分限制補(bǔ)液或鹽液體補(bǔ)充過多，造成醫(yī)源性高鈉血癥、高氯血癥。病變影響滲透壓感受器，喪失對(duì)血漿滲透壓的調(diào)節(jié)功能，實(shí)質(zhì)是一種神經(jīng)性高滲透壓癥［15］。有報(bào)道發(fā)病1周后出現(xiàn)的高鈉血癥往往是中樞性，當(dāng)下丘腦和神經(jīng)垂體受損時(shí)，ADH分泌減少，出現(xiàn)多尿與尿比重下降而表現(xiàn)為高鈉血癥，而此類高鈉血癥一旦出現(xiàn)且持續(xù)高鈉表明是瀕危的信號(hào)。中、重型患者產(chǎn)生上述病變的機(jī)會(huì)多于輕型，故出現(xiàn)高鈉血癥多于輕型患者。

3.3 ACVD時(shí)血鉀的變化 ACVD時(shí)血鉀紊亂的機(jī)制尚不明確，有學(xué)者認(rèn)為［16］早期低鉀血癥的因素主要是原發(fā)于卒中病變直接損害丘腦下部導(dǎo)致功能紊亂，使細(xì)胞外鉀轉(zhuǎn)入肌肉及肝細(xì)胞內(nèi)而出現(xiàn)低鉀血癥。筆者認(rèn)為產(chǎn)生低鉀血癥的常見原因除上述原因外，還有攝入過少，應(yīng)用滲透性利尿劑使腎臟排鉀過多；此外如中樞性高熱、植物神經(jīng)功能紊亂、大量出汗等使失鉀過多。本組資料顯示低鉀血癥發(fā)生率明顯高于低鈉血癥、低氯血癥、高鉀血癥、高鈉血癥及高氯血癥，但低鉀血癥患者在卒中類型、病情輕重及病死率方面差異無顯著性，看來低鉀血癥的發(fā)生不是腦卒中的危險(xiǎn)并發(fā)癥。本組資料，高鉀血癥的發(fā)生率極低，但中、重型患者多于正常血鉀組及低血鉀組，且病死率顯著增加。

綜上所述，ACVD易出現(xiàn)應(yīng)激性高血糖、低血鈉、低血氯、低血鉀，且血糖高低與中風(fēng)類型、病情及預(yù)后關(guān)系密切。除應(yīng)激性高血糖外，血鈉、血氯降低是反映ACVD患者病情及預(yù)后的指標(biāo)。由于血糖和血清電解質(zhì)是臨床上易于獲得和監(jiān)測(cè)指標(biāo)，本研究組提示臨床醫(yī)師在診治ACVD時(shí)重視監(jiān)測(cè)血糖及血清電解質(zhì)的變化，及時(shí)發(fā)現(xiàn)、正確處理其失衡情況，以穩(wěn)定機(jī)體內(nèi)環(huán)境，對(duì)ACVD患者的治療十分重要，必將提高ACVD患者的存活率及治愈率。

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學(xué)雷鋒計(jì)劃范文第5篇

【關(guān)鍵詞】 關(guān)節(jié)炎，類風(fēng)濕；斷藤益母湯；含藥血清；滑膜成纖維細(xì)胞；腫瘤壞死因子-α；實(shí)驗(yàn)研究；動(dòng)物

Effects of Serum Containing Duanteng Yimu Decoction on Proliferation of Fibroblast-like Synoviocytes and TNF-α Production in Patients with Rheumatoid Arthritis

Liang Jiang，Lin Chang-song，Lin Yun-bin

【ABSTRACT】Objective：To investigate the effects of serum containing duanteng yimu decoction （DYD） on proliferation of fibroblast-like synoviocytes （FLS） and TNF-α （tumor necrosis factor-α，TNF-α） production in rheumatoid arthritis patients.Methods：3 kinds of rabbits serum [normal，serum containing leflunomide （LEF），serum containing DYD] were made.RA-FLS were separated from knee joints of RA patients and subcultured for 3-5 generations.RA-FLS cells were divided into 3 groups： the control group，the LEF group （serum containing LEF） and the DYD group （serum containing DYD） and then proliferation of cells in 3 groups were evaluated by MTT at three time points （24，48，72 h）.After 72 h，cell culture medium was used to detect the TNF-α level with ELISA method.Results：Compared with the control group，after 48 h，72 h，Leflunomide and DYD serums have obviously inhibitive effects on the prolifration of RA-FLS from patients （Ρ < 0.05）.After 72 h，prolifration of RA-FLS in the LEF group was lower than the DYD group （Ρ < 0.05）.Compared with the control group，the two medicated serums have obvious inhibition on the TNF-α level （Ρ < 0.05），but with no significant difference between medicated serum groups （Ρ > 0.05）.

Conclusion：DYD can inhibit RA-FLS proliferation in conventional dose and reduce the production of TNF-α，which suggests one of the therapeutic mechanisms of DYD for RA.

【Key words】 arthritis，rheumatoid；duanteng yimu decoction；medicated serum；fibroblast-like synoviocytes；tumor necrosis factor-α；experimental study；animal

在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）病情進(jìn)程中，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞（RA-FLS）過度增殖，同時(shí)釋放大量諸如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎性細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致了滑膜炎和骨侵蝕的持續(xù)，因此，抑制RA-FLS增殖、降低外周血和關(guān)節(jié)液中TNF-α的含量已成為治療RA的可行方法[1]。斷藤益母湯由林昌松教授根據(jù)RA急性活動(dòng)期“肝腎虧虛，風(fēng)濕瘀阻”中醫(yī)病機(jī)研制出的經(jīng)驗(yàn)方，本實(shí)驗(yàn)（2011年7月至2012年3月）擬觀察該方含藥血清對(duì)體外培養(yǎng)人RA-FLS增殖及其TNF-α分泌的影響。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 滑膜組織來源 選取2011年在廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院行膝關(guān)節(jié)置換術(shù)的女性RA患者2例，均符合1987年美國風(fēng)濕病學(xué)會(huì)修訂的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)本獲取經(jīng)由患者及主管醫(yī)師知情同意。

1.2 藥品與試劑 斷藤益母湯（DYD）由川續(xù)斷15 g、桂林產(chǎn)昆明山海棠45 g、益母草15 g組成。所有中藥飲片均購自廣州致信藥業(yè)有限公司，水煎2 次合并藥液，3次過濾濃縮，給藥時(shí)以注射用水定容至0.6 g?mL-1；來氟米特（LEF），國藥準(zhǔn)字H31020644，批號(hào)201103，規(guī)格20 mg，購自江蘇欣凱-有限公司。I型膠原酶、RPM I1640培養(yǎng)液、胰蛋白酶、胎牛血清，購自美國Invitrogen公司；噻唑藍(lán)（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）， 購自美國Sigma公司。

1.3 主要儀器 高速低溫離心機(jī)（LAB-Y01型，TCHLAB，廣州）；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀（美國BIO―RAD680公司）；倒置顯微鏡（OLYMPUS-Ⅱ，日本）；CO2培養(yǎng)箱（HF90型，鄭州南北儀器有限公司生產(chǎn)）。

1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性新西蘭大耳兔12只，5周齡，體質(zhì)量（2.0±0.5）kg。動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（粵）2008-0020。由廣東省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供并飼養(yǎng)在清潔級(jí)環(huán)境中。

2 方 法

2.1 給藥干預(yù)與含藥血清的制備 按隨機(jī)數(shù)字法將受試家兔平均分為3組，并按以下方法連續(xù)灌胃7 d。DYD組：3.45 g?kg-1DYD；LEF組：1.92 mg?kg-1

LEF。（家兔給藥量均按50 kg成人常用劑量折算，其中LEF為20 mg ，每日1次，中藥按生藥量90 g，每日1次）。對(duì)照組給予15 mL生理鹽水，分早晚2次連續(xù)灌胃1周。按文獻(xiàn)[2]所述方法制取含藥血清：所有家兔在末次給藥1 h后心臟采血，離心取血清，56 ℃ 水浴滅活30 min，0.2 μm微孔濾器過濾，-20 ℃凍存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 RA-FLS的原代培養(yǎng)與鑒定 按文獻(xiàn)[3]提供的組織塊法用RA滑膜組織進(jìn)行RA-FLS原代培養(yǎng)：將手術(shù)取得的滑膜組織剪去脂肪組織和較大的血管，用生理鹽水漂洗3次，去除血污雜質(zhì)，剪成1 mm3碎屑后，用移液管吸附移入培養(yǎng)瓶，然后用2 mL注射器針頭將組織塊在瓶底按大約5 mm間距排布，反轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，在未鋪排組織塊的一側(cè)瓶底注入培養(yǎng)液，培養(yǎng)瓶置入37 ℃、CO2體積濃度為5%的培養(yǎng)箱內(nèi)4 h，再次反轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶使貼壁的組織塊接觸培養(yǎng)液，視細(xì)胞生長情況2～5 d更換1次培養(yǎng)液。當(dāng)細(xì)胞長至融合度約70%時(shí)予傳代處理：培養(yǎng)液中加入0.25%的胰蛋白酶1 mL消化至細(xì)胞皺縮變圓時(shí)，加入培養(yǎng)液終止消化，將細(xì)胞懸液再次按1∶2分瓶培養(yǎng)，取第3～5代細(xì)胞，細(xì)胞爬片經(jīng)蘇木精-伊紅染色（HE）倒差顯微鏡鑒定純度在95%以上計(jì)為合格，用于后續(xù)試驗(yàn)。

2.3 各組細(xì)胞抑制率與培養(yǎng)上清TNF-α含量的檢測(cè) 取3～5代細(xì)胞，按每孔100 uL單細(xì)胞懸液（內(nèi)含約2 000個(gè)細(xì)胞）植入96孔培養(yǎng)板，待細(xì)胞鋪滿培養(yǎng)板80%左右時(shí)，每孔更換為90 μL的RPM I1640 培養(yǎng)液，分3組干預(yù)。對(duì)照組加入10 μL正常家兔血清；LEF組加入10 μL LEF家兔血清；DYD組加入10 μL DYD家兔血清。在37 ℃、體積濃度5 % CO2培養(yǎng)箱中分3個(gè)時(shí)點(diǎn)培養(yǎng)（24 h、

48 h、72 h），72 h后留取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清按ELISA試劑盒說明檢測(cè)TNF-α含量，每組6個(gè)復(fù)孔。分別于24 h、48 h、72 h后取各組細(xì)胞，加入濃度為5 mg?mL-1的噻唑藍(lán)10μL共培養(yǎng)4 h，棄上清液，加DMSO 200μL作用10 min，在設(shè)定波長為490 nm

條件下用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)各組細(xì)胞吸光度值（OD值），按公式計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞增殖的抑制率，公式如下：抑制率%=（1-含藥血清組OD值/對(duì)照組OD值）×100%。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有數(shù)據(jù)以表示，采用單因素方差分析，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 RA-FLS的培養(yǎng)鑒定 在倒差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)所見如下：原代RA-FLS成長呈長纖維狀，以原組織塊所在位置（因細(xì)胞貼壁成功，原組織塊已經(jīng)移去）為中心呈射線狀向周圍輻射生長，間雜少量圓形的巨噬樣滑膜細(xì)胞；培養(yǎng)5～10 d

后，原代RA-FLS增殖與傳代速度明顯增快，巨噬樣滑膜細(xì)胞因在此培養(yǎng)環(huán)境內(nèi)增殖慢，凋亡快，數(shù)目不斷減少，見圖1。第3代RA-FLS的HE染色細(xì)胞爬片顯示：第3代的RA-FLS細(xì)胞呈典型的長纖維狀或紡錘形，卵圓形細(xì)胞核位于細(xì)胞質(zhì)中間，核仁明顯較原代增大，視野內(nèi)細(xì)胞密集程度增高，巨噬樣細(xì)胞進(jìn)一步減少，而RA-FLS所占比例大于95%，與文獻(xiàn)報(bào)道的特征相符，見圖2。

3.2 各組血清干預(yù)對(duì)RA-FLS增殖抑制情況比較（MTT法） 該實(shí)驗(yàn)中OD值反映了細(xì)胞存活數(shù)量，細(xì)胞抑制率反映了血清干預(yù)對(duì)細(xì)胞增殖的抑制強(qiáng)度。隨著干預(yù)時(shí)間的延長，各組細(xì)胞OD值呈增長趨勢(shì)，在48 h、72 h兩個(gè)時(shí)點(diǎn)，兩種含藥血清組OD值均明顯低于當(dāng)時(shí)的對(duì)照組（P

說明干預(yù)48 h、72 h后，兩種含藥血清均能一定程度上抑制RA-FLS增殖。同一時(shí)間點(diǎn)不同含藥血清組間比較，24 h后，DYD組OD值明顯低于LEF組（P0.05）；72 h后，LEF組OD值中明顯低于DYD組（P

72 h末LEF含藥血清的抑制效果較DYD組更強(qiáng)，見表1。

3.3 72 h后RA-FLS培養(yǎng)上清TNF-α含量的情況 對(duì)照組的TNF-α含量為134.22±13.21 pg?mL-1，DYD組為108.58±12.75 pg?mL-1，LEF組為98.36±

11.76 pg?mL-1。兩種含藥血清組細(xì)胞培養(yǎng)上清中TNF-α含量明顯低于對(duì)照組（P

（P>0.05）。

4 討 論

RA屬中醫(yī)學(xué)“歷節(jié)”“痹病”范疇?！督饏T要略?中風(fēng)歷節(jié)病脈證并治》對(duì)本病病機(jī)闡釋為“寸口脈沉而細(xì)，沉即為腎，弱即為肝，汗出入水中……故曰歷節(jié)”“風(fēng)血相博，即疼痛如掣”，指明肝腎虧虛，氣血不足是其發(fā)病的內(nèi)在基礎(chǔ)，風(fēng)、寒、濕等外邪侵襲是外在誘因，作為該病病理產(chǎn)物的瘀血易與外邪纏結(jié)，痹阻經(jīng)脈使肝血、腎精不能濡養(yǎng)筋脈、骨骼，最終導(dǎo)致筋傷骨損。林昌松教授秉承前述中醫(yī)理論對(duì)RA的認(rèn)識(shí)，在長期的臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，嶺南地區(qū)氣候潮濕多風(fēng)，風(fēng)邪、濕邪是誘發(fā)加重RA癥狀的主要外在原因，而滑膜炎的持續(xù)與滑膜組織大量微血管彌漫性增生、充血、釋放炎癥因子密切相關(guān)，與中醫(yī)學(xué)“瘀血致病”導(dǎo)致腫痛癥狀的機(jī)制有相通之處。因此，林昌松教授將嶺南地區(qū)RA急性活動(dòng)期的主要證型辨證為邪滯血瘀型，病機(jī)為“肝腎虧虛為本，風(fēng)濕瘀阻為標(biāo)”，并確立了“補(bǔ)肝腎、祛風(fēng)濕、散瘀血”的治法，研制出斷藤益母湯這一經(jīng)驗(yàn)方。針對(duì)當(dāng)?shù)仫L(fēng)邪、濕邪偏勝，該方以桂林產(chǎn)昆明山海棠（該藥在嶺南地區(qū)民間俗稱為南蛇藤）為君藥，取其祛風(fēng)勝濕之功驅(qū)外邪；針對(duì)內(nèi)生之邪瘀血，臣藥選擇益母草以化瘀消腫利水，針對(duì)肝腎不足筋骨失養(yǎng)的虛損方面，以補(bǔ)肝腎壯筋骨的川續(xù)斷培補(bǔ)正氣，同時(shí)，兩味臣藥的配伍有補(bǔ)益肝腎、活血通經(jīng)以拮抗君藥生殖毒性的寓意，全方正邪兼顧，切合病機(jī)。筆者等通過70例RA急性活動(dòng)期患者的隨機(jī)對(duì)照臨床試驗(yàn)[4]證實(shí)，經(jīng)過12周的治療，口服DYD的試驗(yàn)組與口服LEF每日20 mg

的對(duì)照組患者在DAS28評(píng)分改善方面療效相當(dāng)。體外實(shí)驗(yàn)[5]證實(shí)，一定濃度的斷藤益母湯含藥血清可抑制RA-FLS增殖，其機(jī)制可能與該方含藥血清下調(diào)脂多糖誘導(dǎo)的Toll樣受體4的mRNA的表達(dá)、一定程度上抑制了RA-FLS的異常增殖狀態(tài)相關(guān)，但該方含藥血清是否對(duì)RA-FLS分泌的TNF-α有直接抑制作用尚不明確 。另有報(bào)道[6]川續(xù)斷的有效組分續(xù)斷皂苷具有一定程度的抗炎止痛和抗骨質(zhì)疏松作用。研究證實(shí)，自古被視為婦科活血調(diào)經(jīng)良藥的益母草組分水蘇堿有促進(jìn)微動(dòng)脈血流恢復(fù)、抗血小板聚集[7]的作用，可見斷藤益母湯的抗RA作用也有一定現(xiàn)代藥理學(xué)依據(jù)。

FLS是滑膜組織的主要組成部分，當(dāng)它在各種誘因下異?；罨癁镽A-FLS后，呈現(xiàn)出增生過度、凋亡不足的特征，直接導(dǎo)致滑膜增厚和血管翳的形成。同時(shí)，RA-FLS可產(chǎn)生或誘生一系列細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)，使病灶區(qū)滑膜組織聚集更多的炎癥相關(guān)細(xì)胞（如中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等），維系了滑膜炎的持續(xù)以及軟骨、骨組織的進(jìn)行性破壞。而TNF-α即是在RA滑膜組織細(xì)胞大量分泌的炎癥因子之一，對(duì)啟動(dòng)滑膜炎癥和關(guān)節(jié)損害意義重大。它可協(xié)同白介素-1通過以下4方面參與RA病理過程[8]：①增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子表達(dá)，使血液中的白細(xì)胞向關(guān)節(jié)腔病灶區(qū)聚集；②刺激前列腺素等小分子炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生；③激活破骨細(xì)胞，促進(jìn)糖蛋白、膠原酶降解，導(dǎo)致骨質(zhì)破壞；④促進(jìn)軟骨細(xì)胞和滑膜組織細(xì)胞產(chǎn)生大量白介素-6，后者有增強(qiáng)TNF-α和白介素-1效能的作用。此外，當(dāng)病灶區(qū)細(xì)胞（含RA-FLS）分泌TNF-α達(dá)到一定濃度（10 ng?mL-1）可導(dǎo)致RA-FLS呈現(xiàn)持續(xù)過度增殖狀態(tài)，可能與TNF-α使該RA-FLS表面具有抗細(xì)胞凋亡作用的TNFRⅡ基因表達(dá)上調(diào)相關(guān)。由此可見，RA-FLS及病灶區(qū)高濃度的TNF-α在RA復(fù)雜的細(xì)胞交互影響網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮主導(dǎo)作用，抑制RA-FLS增殖和TNF-α的分泌是治療RA的有效措施。

有研究顯示，昆明山海棠水提取物可以抑制離體培養(yǎng)的RA-FLS增殖[4]，但水提取物的直接干預(yù)與口服藥物經(jīng)消化、吸收、代謝之后的成分可能不一致，二者對(duì)RA-FLS作用強(qiáng)度與起效機(jī)制是否存在差異也不明確。有效成分不清楚、藥代動(dòng)力學(xué)特點(diǎn)難以精確量化是中藥復(fù)方實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展艱難的關(guān)鍵問題，雖然起源于日本的血清藥理學(xué)研究方法仍存在許多不足，但該方法的應(yīng)用一定程度上模擬了中藥起效的生理內(nèi)環(huán)境，為中藥復(fù)方在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究創(chuàng)造了有利條件。

本實(shí)驗(yàn)制取家兔含藥血清干預(yù)第3代的人類RA-FLS，研究結(jié)果顯示，一定濃度的DYD含藥血清干預(yù)48 h即可以抑制RA-FLS的腫瘤樣增殖，48 h末作用強(qiáng)度與LEF相當(dāng)，72 h后抑制作用仍然存在但效果低于LEF。LEF是目前廣泛使用的治療RA常用藥，口服后在肝內(nèi)轉(zhuǎn)化為活性成分M1，具有明確的抑制細(xì)胞增殖作用[7]，故制取該藥含藥血清作為陽性對(duì)照組，兩種含藥血清均能抑制RA-FLS分泌TNF-α，作用強(qiáng)度相當(dāng)，這可能是兩藥共同的抗風(fēng)濕作用機(jī)制之一。然而，DYD含藥血清具體通過何種機(jī)制導(dǎo)致細(xì)胞增殖率降低、是否對(duì)細(xì)胞周期產(chǎn)生影響尚不明確，而兩含藥血清組TNF-α含量較對(duì)照組降低是源自細(xì)胞凋亡總體分泌量減少還是細(xì)胞分泌功能的減低也有待進(jìn)一步深入研究探討。

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