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臨床分子遺傳學范文第1篇

關鍵詞：Angelman綜合征；運動型腦癱；康復訓練

1臨床資料

患兒男，2011年10月19日出生，現(xiàn)25個月，因不能獨坐、不會翻身、主動抓物意識差于2012年6月26日就診，隨后開始康復訓練，迄今為止共做了4個療程，康復項目有PT、OT、理療、言語治療，3個月為1個療程，安排3次/w訓練，OT為20 min，PT為30 min，言語為30 min，1個療程復評1次，根據(jù)患兒進步情況重新制定新的治療處方。該患兒系G4P2，母孕39+1 w剖宮產(chǎn)娩出，出生體重3.55 Kg，否認窒息搶救史，否認病理性黃疸及抽搐史，母孕期有妊高征，患兒3月齡時曾患重度肺炎，患兒有一同母異父姐姐體健?；純捍筮\動發(fā)育落后，11個月會獨坐，18個月會腹爬，至今不會四點爬，扶物站立不穩(wěn)。雙手精細動作發(fā)育落后：能拇食指對捏，但不會搭積木，不會拿筆亂畫。語言與認知發(fā)育落后：15個月能認生人，叫名字有反應，18個月偶能發(fā)出"a、gege"的聲音，至今不會發(fā)"baba、mama" 音，認知能力差，現(xiàn)能分辨生熟人，能聽懂簡單指令，不能完成復雜活動?；純?歲8個月時出現(xiàn)無熱驚厥，表現(xiàn)為肌陣攣發(fā)作，確診為癲癇，開始口服抗癲癇藥物治療，調(diào)整抗癲癇藥物左乙拉西坦至250 mg/bid、丙戊酸鈉溶液4 mL/bid和氯硝西泮0.03 mg/qid，癲癇基本控制。查體：表情欣快，右眼斜視，身高正常，頭圍正常，心、肺、腹無明顯異常，四肢肌張力偏低，深淺感覺粗測均無異常，腱反射正常引出，不能獨走。實驗室檢查：血、尿、便常規(guī)，血生化及心電圖未見明顯異常，視頻腦電圖：背景活動明顯變慢；醒睡大量廣泛性和多灶棘波、棘慢波、多棘慢波陣發(fā)，前頭部著；醒睡監(jiān)測到肌陣攣持續(xù)狀態(tài)（清醒著）。頭顱MRI示三腦室偏飽滿。分子遺傳學檢測顯示：患兒染色體15q11PWS/AS相關區(qū)域基因的拷貝數(shù)缺失，為缺失型AS綜合征。

2康復訓練情況

患兒于2012年6月26日首次就診，當時8個月7 d，不會坐、不會翻身、主動抓物意識差，Peabody評估結(jié)果為：粗大運動相當月齡3～5個月，精細運動相當月齡4～6個月，患兒運動能力落后。PT治療處方為：增加頭部控制訓練（利用楔形墊或在四點支撐位下先訓），翻身訓練（用玩具誘發(fā)其主動參與，同時治療師稍加輔助），增加肩胛骨、軀干、骨盆的分離運動，輔助坐位及仰臥位到坐位轉(zhuǎn)換訓練，增加軀干控制能力。OT治療處方為：上肢各關節(jié)的擠壓，增加其本體感覺，加強主動抓物訓練（在中線位操作），四點支撐增加肩關節(jié)穩(wěn)定性及上肢負重訓練。

患兒于2012年9月29日復評，11個月10 d，Peabody評估結(jié)果為：粗大運動相當月齡7～9個月，精細運動相當月齡6～8個月，可獨坐，軀干控制能力尚可，可主動抓物，有一定模仿能力，現(xiàn)主要問題為移動能力差，不會爬，抓物姿勢以把抓為主，協(xié)調(diào)性差。PT治療處方為：加強坐位控制能力訓練（加干擾誘發(fā)其左右及后方保護反射），移動能力的訓練：從坐位到四點位的轉(zhuǎn)換，腹爬訓練。OT治療處方為：加強手眼協(xié)調(diào)，雙手操作訓練，如插放木棒，對敲積木，加強三指抓、拇食指對捏訓練。

在此治療時間，患兒經(jīng)常生病住院，康復訓練有斷續(xù)，于2013年7月12日復評，20個月23 d，Peabody評估結(jié)果為：粗大運動相當月齡8～12個月，精細運動相當月齡10～11個月，象征性游戲測試：測試分數(shù)為3，相當年齡

在此治療期間患兒癲癇發(fā)作頻繁，康復訓練暫停，在住院期間確診為Angelman 綜合征，癲癇藥物控制后康復訓練繼續(xù)，于2013年11月27日復評，患兒25個月8d，Peabody評估結(jié)果為：粗大運動相當月齡8～12個月，精細運動相當月齡7～8個月，與之前相比患兒精細運動能力有退步，對外界刺激較敏感，有觸覺刺激和抵觸行為，主動抓物意識差，與人眼神交流少。PT治療處方為：加強高跪、單跪、扶站訓練（扶髖站立或利用梯背架），增加其下肢負重及髖關節(jié)控制能力訓練，四點爬，促進手腳分離運動及協(xié)調(diào)性、重心轉(zhuǎn)移能力訓練。OT治療處方為：加強上肢各關節(jié)擠壓，增加其本體感覺及關節(jié)穩(wěn)定性，用刺球加強上肢觸覺刺激，抓放物品及換手訓練。因患兒認知能力差，故ST處方不變，仍需加強訓練。

3討論

據(jù)報道，Angelman綜合征發(fā)病率約為1/12000～1/20000[1]，是一種相對少見的疾病，臨床癥狀多樣化，其診斷主要依靠特征的臨床表現(xiàn)、腦電圖和分子遺傳學檢查。由于早期患兒的表現(xiàn)不具有特異性，加上我們對AS的認識不足，該病例早期曾被誤診為共濟失調(diào)型腦癱，直至患兒癲癇發(fā)作，進一步檢查腦電圖和分子遺傳學檢查之后才被確診為AS[2]。根據(jù)患兒的分子遺傳學檢查報告，本病例患兒屬于母源染色體15q11.2-13微缺失型。有文獻報道15q11-13缺失型AS主要由于母源15q11-13新生缺失突變所致，再發(fā)風險

參考文獻：

[1]白晉麗，宋，鄒麗萍，等.15q11-13缺失型Angelman綜合征17例遺傳學診斷及臨床特點[J].中華兒科雜志，2010，48（12）：939-943.

[2]劉立軍，白晉麗，瞿宇晉，等.Angelman綜合征的遺傳學診斷[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志，2009，26（5）：495-498.

臨床分子遺傳學范文第2篇

關鍵詞：全反式維甲酸；化療；NPM1陽性；急性髓系白血病；臨床療效

急性髓系白血?。╝cute myeloid Leukemia，AML）是一組在臨床及細胞遺傳學上均具有高度異質(zhì)性的綜合征，其臨床主要特征是分子遺傳學和表觀遺傳學遺傳引起的造血干、祖細胞的自我更新、增殖和分化異常。近年來越來越多的研究證實急性髓系白血病的預后情況和多參數(shù)指標均有密切關系，其中最為突出的是骨髓細胞的染色體核型和分子基因的異常對預后的影響，目前國際上已經(jīng)把FLT3基因突變作為評判急性髓系白血病預后的危險分層的重要指標。NPM1基因突變是近年來發(fā)現(xiàn)的AML中最為常見的II類基因突變，其發(fā)病率高達25%～35%，在正常核型AML中發(fā)生率達到55%～65%。目前，NPM1基因已成為具有評估預后價值的分子標記物，特別是其在正常核型AML患者中的意義，已得到公認。臨床上對于NPM1陽性的急性髓系白血病更多的以化療為主，該方法雖然能緩解臨床癥狀，但是治療并發(fā)癥發(fā)生率較高，死亡率較高。近年來，全反式維甲酸聯(lián)合化療在NPM1陽性的急性髓系白血病患者中得到應用，且效果理想。為了探討全反式維甲酸聯(lián)合化療在NPM1陽性的急性髓系白血病患者中的臨床療效，選取2014年12月～2016年2月醫(yī)院診治的20例NPM1陽性的急性髓系白血病患者資料進行分析，報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選取2014年12月～2016年3月醫(yī)院診治的20例NPM1陽性的急性髓系白血病患者資料進行分析，將患者根據(jù)隨機數(shù)字方法分為試驗組和對照組。試驗組10例，男6例，女4例，年齡15～69歲，平均（42.5±25.5）歲，病程1～10月，平均（4.2±3.4）月；對照組10例，男5例，女5例，年齡15～69歲，平均（36.5±20.5）歲，病程1～10月，平均（3.2±1.9）月。入選患者均符合NPM1陽性的急性髓系白血病臨床診斷標準?；颊邔υ\斷方法、試驗方案等具有知情同意權(quán)，且自愿簽署知情同意書，患者臨床資料差異無統(tǒng)計學意義。

1.2治療方法 兩組患者治療過程中根據(jù)病情給予成分輸液、補充血小板、小劑量肝素靜脈滴注。對照組采用化療方案治療方法：根據(jù)患者年齡情況，一般體能狀況分層按CAMLG2010和CAMLE2010方案實施標準化療；試驗組在對照組基礎上聯(lián)合全反式維甲酸治療方法：自化療當日起加口服10 mg全反式維甲酸1 次/8h，連續(xù)治療14 d。兩組患者治療期間根據(jù)患者肝功能變化、外周血細胞計數(shù)+網(wǎng)織紅細胞計數(shù)，骨髓細胞形態(tài)學變化。

1.3療效標準 完全緩解（CR）：患者臨床體征消失，外周血常規(guī)恢復正常，骨髓形態(tài)原始細胞比例25%，骨髓形態(tài)原始細胞比例下降不明顯或者超過治療前水平。

1.4觀察指標 觀察兩組患者臨床治療效果、平均緩解時間以及藥物不良反應發(fā)生率。

1.5統(tǒng)計分析 采集數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料行χ2檢驗，采用n，%表示；計量資料行t檢驗，采用（x±s）表示，P

2結(jié)果

試驗組治療后9例CR，1例PR，治療總有效率為100.0%，顯著高于對照組的5例CR，2例PR，2例NR，1例死亡，總有效率為70.0%（P

3討論

NPM1基因突變早在2008年造血和淋巴組織腫瘤的分類中將其納入AML伴重現(xiàn)性遺傳學異常中，用于臨床分類。NPM1突變主要在正常核型中，另有11%～15%NPM1突變發(fā)生在除核型正常以外的患者，同時合并各種細胞遺傳學異常改變，但其在遺傳核型的發(fā)生及意義尚不十分清楚；因此，臨床上的研究更多的集中在正常核型NPM1突變的AML中。2011年美國NCCN指南根據(jù)細胞遺傳學及分子生物學表現(xiàn)將AML分為低危、中危、高危3個亞群，其中NPM1陽性伴正常核型的AML列為低危組，我們國內(nèi)在AML細胞遺傳學及分子生物學研究中相對滯后，近年來一直沿用NCCN指南標準對AML進行分層診療；臨床上按患者年齡及體能狀況進行分組治療，對于NPM1陽性正常核型的急性髓系白血病患者更多的以多療程阿糖胞苷為基礎的化療為主，該方法雖然能改善患者癥狀，提高臨床療效，但是化療骨髓抑制時間長，并發(fā)癥多，病人耐受性差，死亡率較高，患者治療依從性較差。

近年來，全反式維甲酸聯(lián)合化療在NPM1陽性的急性髓系白血病患者中得到應用，且效果理想。本研究中，試驗組治療后治療總有效率為100.0%，顯著高于對照組的70.0%（P

綜上所述，NPM1陽性的急性髓系白血病患者在化療基礎上聯(lián)合全反式維甲酸治療效果理想，臨床運用有明顯優(yōu)勢，值得推廣應用。

參考文獻：

臨床分子遺傳學范文第3篇

1965年生于重慶合川縣，教授、研究員、博士生導師?，F(xiàn)任中國科協(xié)委員，西部地區(qū)精神疾病分子遺傳學科學術(shù)帶頭人，四川大學華西醫(yī)院精神醫(yī)學研究室主任。

她多年來致力于精神疾病的遺傳病因?qū)W研究，先后主持了國家科技部，國家自然科學基金等國家級課題和高難度國際協(xié)作課題10余項；在國際國內(nèi)專業(yè)學術(shù)期刊上發(fā)表精神疾病分子遺傳學研究論文70余篇，其中SCI收錄40余篇。她于1997年獲全國“吳階平醫(yī)學研究獎”，2001年獲第七屆“中國青年科技獎”，2005年獲第二屆“中國青年女科學家獎”。

精神疾病，這個名詞聽起來就讓人“敬而遠之”，但是當年剛剛大學畢業(yè)，正值花樣年華的李濤卻選擇了到精神科工作，而且一干就是18年。

18年來與精神病患者打交道，李濤就是為了幫助精神病患者，治療他們，希望真正找到致病原因，進而“徹底解放他們”。“如果你見到一些精神病患者和他們的家庭，就一定會同情他們，幫助他們。其實這也是在為社會分憂，因為重度性精神分裂癥患者往往會對社會造成較大危害。”李濤說。

18年過去了，今天李濤依然像當初一樣熱愛自己的事業(yè)，一路前行，無怨無悔。

關愛――選擇奉獻的理由

1965年3月，一個春暖花開的日子里，李濤出生在合川縣城一個干部家庭。從小學到高中，她都十分熱愛學習，成績一直名列班上前茅。

1981年，李濤參加高考。雖然考試發(fā)揮失常，但還算是高分，被四川醫(yī)學院(現(xiàn)四川大學華西醫(yī)學院)錄取，學習臨床醫(yī)學專業(yè)。周圍的親朋都很羨慕她，紛紛夸她前程遠大。但1987年當李濤大學畢業(yè)時，她卻留校主動選擇了精神科，這讓親朋好友們都有些迷惑了，為什么要干這個有“風險”的行當呢?他們關心地告訴她：“將來你如果搞臨床，整天同精神病患者打交道，你就不擔心患者犯病時傷害你?到時你后悔就晚了!”

面對大家的善意提醒，李濤沒有猶豫，她依然義無反顧地堅持自己的選擇。

也許是命運想考驗李濤的意志，1987年李濤收治了一位40多歲患抑郁癥的女患者，卻出現(xiàn)了一個不幸的結(jié)果。女患者有一個幸福的家，她在接受醫(yī)治一個多月后，病情有所好轉(zhuǎn)，就被家人接回去了。但沒過多久，這位患者舊病復發(fā)導致自殺。消息傳來，李濤深受刺激，好多天她都感到心痛。

那些天，她寢食不安，她尋找，她思考，她希望通過自己的努力能夠找到精神病的病理學原因，以便把這個人群從精神的桎梏中解救出來。

從那以后，李濤就一直全心致力于精神病發(fā)病原因的研究。在精神科病房擔任住院醫(yī)師時，她曾有半年的時間完全與患者在一起，每天24小時都在醫(yī)院，一周只回家一次。除了臨床診治病人，她還潛心研究課題，積累學識。她向往有一天，能拿出真正有效的預防和治療措施，為患者減少痛苦。

18年來，李濤接觸了上千例精神病人?！拔曳浅Ｏ矚g這個專業(yè)。只要是喜歡的事，就不會覺得辛苦!”她對自己當初的選擇無怨無悔。但她也曾有害怕的時候：有醫(yī)院的醫(yī)生被精神病患者打傷，她也曾為此落淚?！安粮裳蹨I后，想的是，一定要想辦法治好那個病患!”李濤說。

尋找――花開沃土別樣紅

科學研究表明，精神病具有遺傳性，與基因病變有關。為了說明這個問題，李濤打了個比方：“父母遺傳的基因中，如果存在幾個可能導致精神病的基因，就好比在人體中埋藏了幾顆‘定時炸彈’，外界的刺激不過是‘導火索’而已，即使沒有‘導火索’，在一定的時間，‘定時炸彈’也可能會爆炸的?！?/p>

為加快尋找致病基因的進程，1989年，李濤又考取了本校研究生(碩博連讀)，成為華西醫(yī)大博士生導師劉協(xié)和的弟子，開始了潛心找尋那些“定時炸彈”的旅程。

李濤迅速嶄露頭角。博士即將畢業(yè)時，正值導師劉協(xié)和又應邀到倫敦參加學術(shù)研討會，他把李濤的博士論文的研究內(nèi)容向英國精神病學研究室主任大衛(wèi)?科里爾作了介紹后，這位英國專家當即就說：“這很好，她既懂精神病學，又能搞分子遺傳學，我愿意與你們建立合作關系，共同研究。”

在劉協(xié)和教授的努力下，李濤得到英國方面提供的研究經(jīng)費，赴英國進行一年的合作研究。其間，她爭分奪秒，刻苦鉆研，一心撲在研究上，使課題進展非常順利，合作成果顯著。合作結(jié)束后，她再次被對方邀請留在英國，做博士后研究，后被聘為高級講師。

功夫不負有心人。1996年，李濤率領精神醫(yī)學研究小組在全球范圍內(nèi)率先發(fā)現(xiàn)一個新的與精神分裂有關的基因――兒茶酚氧位甲基轉(zhuǎn)移酶。其實，在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的與精神病變有關的基因中，李濤就與其中的4個基因發(fā)現(xiàn)有關。李濤的這些研究結(jié)果，為進一步定位與精神分裂癥及其相關性狀有關的易感基因提供了重要的依據(jù)。

也就是說，李濤為全世界科學家繼續(xù)尋找人體中的那幾顆“定時炸彈”，提供了十分有用的坐標與路線圖。它意味著人類在通往征服精神疾病的道路上，又邁進了一步。

執(zhí)著――沒有停歇的“候鳥”

2002年，李濤被聘為博士生導師。從此她正式帶博士生從事專題研究。先后有6位博士生在她門下開展研究，進展迅速，成為該專業(yè)的中堅力量。

2005年8月初，李濤又去歐洲最大的精神病學研究機構(gòu)――英國倫敦大學國王學院精神病學研究所工作了。每年她都會在成都和倫敦之間飛來飛去，兩邊的工作都離不開她。2005年11月8日，李濤被通知參加“中國青年女科學家獎”頒獎典禮，才匆匆結(jié)束了倫敦的工作趕了回來。因為在精神病研究領域取得不菲成績，李濤獲得了全球唯一獎勵科學女性的項目――“中國青年女科學家獎”和“西部特別貢獻獎”，她也是首位獲得該大獎的四川科學家。 “得到這個大獎，我很意外，很多人都做得比我好?！崩顫f，“它促使我要更加努力工作?！?1月9日回到成都后，她把證書丟在家里，又忙開了工作。

提及李濤，導師劉協(xié)和疼愛有加，他說：“李濤對學術(shù)、對同仁充滿了愛心。她利用在英國從事研究的良好條件，幫助導師和她自己的學生出國交流、深造。她從不計較名利，卻特別看重學生與同仁的作為與發(fā)展?！崩顫膶W生馬小紅告訴記者，李老師養(yǎng)成了“談業(yè)務”的習慣，大家即使一起上街購物，閑談的都是實驗室里每位同事的業(yè)務發(fā)展情況，“她總是想著如何在專業(yè)上幫助別人揚長避短，取得新成就”。

作為一名四川大學對口支援專家，李濤還十分關心西部不發(fā)達地區(qū)的醫(yī)藥衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展。她不顧高原反應，赴藏實地考察，對大學醫(yī)學院的相關研究人員進行專業(yè)知識培訓，并幫助設計了自治區(qū)特色疾病高質(zhì)量遺傳資源庫的建設路線、管理規(guī)劃、工作計劃。

2004年，李濤開始擔任四川大學華西醫(yī)院精神醫(yī)學研究室主任。她積極促進華西醫(yī)院與國外一流研究機構(gòu)交流，開展多種形式的國際合作，并定期選派西部年輕精神醫(yī)學、遺傳學工作者到國外學習。

臨床分子遺傳學范文第4篇

原發(fā)性免疫缺陷病(primary immunodeficiency diseases，PID)是由免疫系統(tǒng)成分遺傳性缺陷所致的一組綜合征，可導致抗感染能力、免疫穩(wěn)定功能、免疫監(jiān)視能力降低，引起各種病癥。從1952年Bruton首先證實報道先天性無丙球蛋白血癥為免疫缺陷病以來，對PID的研究已經(jīng)歷近60年的歷程。尤其是近30年來分子遺傳學和免疫學的進步，導致越來越多人類PID被發(fā)現(xiàn)和鑒定，迄今為止已發(fā)現(xiàn)160多種PID[1]，加深了人們對PID的認識，它已成為世界性公眾開始關注的一個重要的公共健康問題，已被越來越多的國家所重視。本文就PID的發(fā)現(xiàn)和研究歷史、PID分類進展及各類PID發(fā)生比率等方面予以重點介紹。

1PID的發(fā)現(xiàn)和研究歷史

20世紀50年代之前，致死性感染比較常見，人們對免疫缺陷病知之甚少。第二次世界大戰(zhàn)后抗生素廣泛使用，認識到淋巴細胞在宿主防御中起著關鍵作用，并能應用蛋白電泳技術(shù)檢測血清中的抗體蛋白，從而能對感染遺傳性敏感的患者進行鑒定。1952年美國兒科醫(yī)師Bruton報道了一例8歲男孩患無丙球蛋白血癥(agammaglobulinemia)[2]，他通過遺傳學(發(fā)生于男孩，有家族史、為X-性聯(lián)隱性遺傳)、臨床病程(早期發(fā)病、反復化膿性感染、抗生素不能根治)和免疫學(血清電泳無丙球蛋白，用肺炎球菌、白喉、傷寒疫苗免疫不產(chǎn)生抗體，輸入人丙球蛋白能有效防治細菌感染)研究證實它是一種遺傳性免疫缺陷病，確立了免疫缺陷病的概念，開啟了人們對免疫缺陷病的認識。

實際上在Bruton之前，已臨床發(fā)現(xiàn)免疫缺陷病[3]。1922年Schultz報告了中性粒細胞減少癥，1926年Syllaba和Henner報告了毛細血管擴張性共濟失調(diào)(ataxia telangiectasia，AT)，1929年Thorpe和Handley發(fā)現(xiàn)了粘膜皮膚白色念珠菌病，1937年Wiskott年發(fā)現(xiàn)了Wiskott-Aldrlch綜合癥，1950年Glanzmann和Riniker發(fā)現(xiàn)了無淋巴細胞的重癥聯(lián)合免疫缺陷病(severe combined immunodeficiency disease，SCID)。甚至在這些報告之前1919年Moore就在一豚鼠系中發(fā)現(xiàn)了未明確的常染色體隱性遺傳的補體缺陷。上世紀50年代主要通過家族遺傳史分析、臨床病程(尤其是反復感染、病情重、抗生素難以治愈、病期長等)、白細胞總數(shù)和分類計數(shù)、血清蛋白電泳、疫苗接種后抗體產(chǎn)生水平等對免疫缺陷病進行分析和診斷，并認識到PID有異質(zhì)性。

20世紀60年代胸腺的作用和抗體產(chǎn)生細胞組織來源的闡明，確立了現(xiàn)代細胞免疫和體液免疫的概念[4]。人類免疫球蛋白類和亞類的確定，利用制備的抗血清用免疫電泳和單相免疫擴散技術(shù)進行定量分析，導致了IgA缺陷病的發(fā)現(xiàn)[5]，但是不能區(qū)分T細胞和B細胞。到20世紀70年現(xiàn)了區(qū)分T細胞和B細胞的方法。1970年Pernis等首先發(fā)現(xiàn)家兔B細胞表面具有Ig[5]之后不久，一些工作者報告觀測到綿羊紅細胞能與人淋巴細胞的一個亞群結(jié)合形成“玫瑰花環(huán)”，1974年Schiff等證實這個亞群細胞就是T細胞和NK細胞[5]。從而可利用這些方法計數(shù)T細胞和B細胞。1975年單克隆抗體技術(shù)[5]及70年代后期流式細胞術(shù)的出現(xiàn)極大改善了計數(shù)不同免疫細胞的技術(shù)能力。

20世紀80年代由于分子遺傳學和分子免疫學的發(fā)展，開啟了對免疫缺陷基因的染色體定位分析、克隆鑒定和測序，建立了按基因克隆基因產(chǎn)物氨基酸序列分析免疫缺陷分子機制研究的技術(shù)線路，加速了免疫缺陷基因的發(fā)現(xiàn)和鑒定，促進了免疫缺陷機制的研究。1986年根據(jù)染色體基因定位分析克隆出了第一個免疫缺陷基因——X-性聯(lián)慢性肉芽腫病的phox91基因[6]。隨后四年(1987-1990)年，數(shù)個實驗室很快證實了phox91基因編碼產(chǎn)物的氨基酸序列結(jié)構(gòu)，并闡明了其免疫學缺陷的分子機制[7]。通過自發(fā)性免疫缺陷動物模型和人工建立的免疫缺陷小鼠(插入免疫成分的突變基因產(chǎn)生的基因敲除小鼠)，也成為研究PID的重要技術(shù)，可以從基因水平、分子水平、細胞水平、整體水平探討免疫缺陷機制和深入闡釋免疫系統(tǒng)功能[8]。免疫學是一門實驗科學，現(xiàn)代分子生物技術(shù)和免疫學實驗技術(shù)的進步，極大的促進了免疫學向縱深發(fā)展，推動了PID的深入研究，也為快速發(fā)現(xiàn)新的PID、科學分類、鑒別和治療奠定了基礎。

2PID的分類

2.1國際PID分類會議

PID是一類相對少見的疾病，20世紀60年代末，將這類疾病分為體液和細胞免疫缺陷兩個部分。世界衛(wèi)生組織(WHO)為了對PID統(tǒng)一命名和分類，指導和提高PID的臨床診斷、鑒別和治療水平，于1970年首次組織了一個專家委員會，開始對PID進行統(tǒng)一命名和分類，到2009年共召開了16次會議[9-11](見表1)。1977年召開的第三次PID專家委員會，WHO倡議PID專家委員會每2~3年組織召開一次會議，對PID分類和命名進行重新修訂，會后發(fā)表分類報告。1996年第10次英國布里斯托爾會議決定，以后的會議組織委員會由國際免疫聯(lián)合會(IUIS)和Jeffrey Modell Foundtion(JMF)共同擔任。最近一次會議于2009-06月在愛爾蘭都柏林召開，參加人員除專家委員會成員外，有來自世界六大洲參加者200多人，發(fā)言人數(shù)30多名。這些會議作為媒介，科學展示了PID及相關課題的研究進展，有力推進了PID的臨床和基礎研究，逐漸加深了人們對PID的認識和關注。表1國際PID分類會議表2八類PID JMF中心調(diào)查的發(fā)生比率

2.2PID分類進展

1970年第一次PID分類國際會議對10種已知的PID進行了統(tǒng)一命名。2000年之前主要根據(jù)免疫系統(tǒng)受損的主要成分對PID進行分類，1999年IUIS對PID的分類主要分為5大類[12]：聯(lián)合免疫缺陷、主要抗體缺陷、其他確定的綜合征、先天性吞噬細胞缺陷、補體缺陷。21世紀開始PID的劃分除了按免疫系統(tǒng)受影響的主要成分外，還要根據(jù)免疫缺陷的致病性進行劃分。2004年發(fā)表的報告增加了3大類缺陷?。好庖呤д{(diào)性疾病、固有免疫性疾病、自身炎癥性疾病，以后大的分類沿續(xù)了2004年的分類模式[9-11]。20世紀70~80年代分子遺傳學和免疫學的飛速發(fā)展，有力地促進了對PID的研究。自1986年第一個免疫缺陷基因——X-性聯(lián)慢性肉芽腫病的phox91基因被鑒定后[6]，PID發(fā)病的分子基礎被逐漸闡明。1999年約有50個PID基因被發(fā)現(xiàn)[12]，到2009年被確定的免疫缺陷基因已上升到約160個[9]，每年約有10個免疫缺陷基因被發(fā)現(xiàn)，估計到2020年將有300多種PID被發(fā)現(xiàn)[13]。

2009年新的分類表中在原項目如病名、基因缺陷/推測的致病性、遺傳方式、相關特征等基礎上新增設一列，以說明各種PID疾病發(fā)生的相對頻率[9]。應該指出，這些頻率的估計是基于已有的文獻報道，除了少數(shù)例外，沒有可靠的流行病學資料可以可靠地定義PID的發(fā)病率。此外，PID的頻率在不同的國家可能會有所不同，某些人群(特別是一些地方種族隔離的群體)由于基礎影響和遺傳漂變，對特定PID基因突變頻率會更高。例如，DNA的交聯(lián)修復蛋白1C(DCLRE1C)(Artemis)和Z-70相關蛋白(ZAP70)缺陷，在阿薩巴斯卡語印第安人和門諾教會成員中比其他人群更常見。同樣，MHC-Ⅱ類缺陷，更容易出現(xiàn)在非洲北部。常染色體隱性免疫缺陷在高血緣率種群中發(fā)生頻率較高[9]。表3JMF中心對原發(fā)性免疫缺陷病發(fā)生比率調(diào)查雖然PID的分類是為了協(xié)助鑒別、診斷和治療病人，但不應教條應用。特別是各PID盡管報告有典型的臨床及免疫表型，但是已認識到這些疾病表型的病譜比原來認識的要復雜。這種變化既反映了PID致病基因、其他基因、表觀遺傳(epigenetic)不同突變的影響，也反映了環(huán)境因素對表型的影響。此外，感染也可顯著改變臨床及免疫表型，即使患者最初就有PID的典型表現(xiàn)。因此，修正的分類表中列出的與單基因缺陷相關的表型，絕不要認為是絕對的[9]。

3各類PID發(fā)生比率

各類PID的發(fā)生比率在不同國家和地區(qū)的調(diào)查結(jié)果有較大差距，但是主要抗體缺陷在PID發(fā)生中所占的比率高于50%[14-15](見表2)，有些國家甚至更高，如西班牙和英國為72%，瑞典甚至高達87%[16]。JMF匯集全球50個國家和地區(qū)35 695例PID統(tǒng)計資料，列出了8類43種免疫缺陷病，顯示主要抗體缺陷中普通可變型免疫缺陷(CVID)、IgA選擇性缺陷、IgG亞類缺陷又最為常見，分別占了主要抗體缺陷的28%、23%、17%，三者合計約68%[14](見表3)，這三類疾病通常癥狀相對較輕、發(fā)病較晚。應該指出表2和表3中的細胞免疫缺陷實際上是IUIS PID分類中的其他確定的綜合征，這類疾病和聯(lián)合免疫缺陷的發(fā)生比率合計約占25%。其次是吞噬細胞缺陷、其他免疫缺陷，補體缺陷、免疫失調(diào)性缺陷、固有免疫缺陷發(fā)生比率更小。在160多種PID中，常染色體隱性遺傳(AR)病約占75.0%，常染色體顯性遺傳(AD)病約占16.5%，X-性聯(lián)隱性遺傳(XL)病占8.5%[9]。X-性聯(lián)隱性遺傳病雖然病種較少，但是他在PID中的發(fā)生比率較高，約占20%以上，而且?guī)缀醵际侵匕YPID[14](見表3)，因此嬰幼兒中男性發(fā)生PID的比例較高。JMF收集的樣本量大，因此其統(tǒng)計的各類PID的發(fā)生比率比以前各統(tǒng)計資料報告更有代表性。但是應該指出，不同地區(qū)和人群會有所差異，隨著PID研究的深入和調(diào)查范圍的擴大，各類PID的發(fā)生比率也會不斷有些變化。

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14Jeffrey Modell Foundtion(JMF)\[J\].Survey Results Published in 2009.

臨床分子遺傳學范文第5篇

【關鍵詞】 角膜營養(yǎng)不良，遺傳性;，基因;，突變;，序列分析，DNA;，聚合酶鏈反應;，系譜

摘要:目的 以基因突變分析一角膜營養(yǎng)不良家系的致病分子基礎。方法 應用PCR產(chǎn)物直接DNA測序及限制性內(nèi)切酶分析檢測家系中7例患者和6例表型正常成員的K3、K12和BIGH3基因突變情況。結(jié)果 該家系患者成員在K3與K12基因的編碼序列區(qū)沒有發(fā)現(xiàn)突變，而BIGH3基因外顯子12存在CGG>TGG(R555W)突變雜合子，家系表現(xiàn)正常成員及正常對照均無BIGH3基因突變;限制性內(nèi)切酶分析結(jié)果顯示突變與疾病表現(xiàn)型呈完全共分離。結(jié)論　利用基因突變分析確診我國首例報道的Meesmann角膜營養(yǎng)不良家系屬于顆粒狀角膜營養(yǎng)不良，且為BIGH3 R555W雜合突變類型。

關鍵詞: 角膜營養(yǎng)不良，遺傳性; 基因; 突變; 序列分析，DNA; 聚合酶鏈反應; 系譜

ABSTRACT: Objective Molecular genetic analysis of a large Chinese corneal dystrophy kindred. Methods Thirteen inpiduals including seven affected and six unaffected family members in this granular corneal dystrophy kindred were studied. Genomic DNA was purified from blood peripheral leukocytes. All of the exons of both the Keratin3 and the keratin12 genes， and the exon 4 and exon 12 of BIGH3 gene were amplified using polymerase chain reaction(PCR)， followed by direct bidirectional sequencing for mutation detection.

The mutation was confirmed by restriction digest analysis. Results Direct sequencing of the patients' genomic DNA revealed there was no mutation in all of the exons of K3 and K12 genes， but a missense mutation(CGG>TGG) in the exon12 of BIGH3(R555W) was found. This mutation in this family completely cosegregates with the disease phenotype. Conclusion This kindred was diagnosed with granular corneal dystrophy harbored a heterozygous R555W mutation of the BIGH3 gene.

KEY WORDS:corneal dystrophy，hereditary; genes; mutation; polymerase chain reaction

基金項目: 福建省自然科學基金資助項目(C0510009)，福建醫(yī)科大學科學研究發(fā)展基金資助項目(FJGXY04020)

角膜營養(yǎng)不良(corneal dystrophy)是一組與遺傳有關的原發(fā)性、具有病理學組織學特征的疾病。目前，已確定與角膜營養(yǎng)不良的致病基因有BIGH3、CHST6、K3、K12、M1S2和GSN等。BIGH3基因突變至少可導致4種類型的角膜營養(yǎng)不良，包括顆粒狀角膜營養(yǎng)不良(R555W)、Avellino角膜營養(yǎng)不良(R124H)、格子狀角膜營養(yǎng)不良(R124C)和ThielBehnke角膜營養(yǎng)不良(R555Q)[1]。K3和K12基因突變導致Meesmann角膜營養(yǎng)不良[2]。筆者研究的家系為福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院眼科普查時發(fā)現(xiàn)，先證者在裂隙燈下檢測可見雙角膜中央?yún)^(qū)有散在的細小圓形小泡，位于上皮層，斜照時呈散在的灰白點狀，后照亮下呈透明小氣泡樣，臨床表現(xiàn)為Meesmann角膜營養(yǎng)不良[3]。2004年，筆者隨訪該家系，家系圖譜表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳;在裂隙燈下檢測先證者，發(fā)現(xiàn)不僅角膜上皮層受累，而且累及角膜實質(zhì)層，臨床表現(xiàn)為顆粒狀或Avellino角膜營養(yǎng)不良。筆者對該家系進行分子遺傳學分析，以確定其類型與致病分子機制。

1 對象與方法

1.1　對象

家系3代38人，受累患者12人，獲得其中7例受累患者和6例非受累正常家系成員的血樣標本，10例無眼疾正常人的血樣標本作為正常對照組(圖1)。:獲取血樣標本的家系成員.

1.2 試劑和儀器

PCR所用試劑、瓊脂糖凝膠、溴化乙錠(EB)、BstXⅠ和DNA分子量標記等(大連寶生物公司);PCR擴增BIGH3基因外顯子12的引物序列: BIGH3e12F:5’CAGCGTGGTGAGGTATTTAAGG3　BIGH3e12R:5’GTAGTAAAGGCTTCCCAGGGTT3’

1.3 基因組DNA提取

取外周血樣3 mL，置于EDTAK3抗凝的真空采血管中;按Wizard Genome DNA Purification Kit(Promega)說明書提取基因組DNA。

1.4 聚合酶鏈反應(PCR)

PCR反應體系25 μL，包括10×PCR緩沖液(20 mmol/L Mg2＋plus)2.5 μL、dNTP mix(2.5 mmol/L each)1 μL、PCR上游和下游引物(10 μmol/L)各1 μL、基因組DNA(約100 ng)1 μL和TakaRa Ex TaqTM 0.25 μL、ddH2O補足25 μL;PCR反應條件為:94 ℃ 3 min94 ℃ 30 s55 ℃ 30 s72 ℃ 30 s，30個循環(huán);72 ℃ 3 min。

1.5 PCR產(chǎn)物直接測序

2％瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物特異性后，PCR產(chǎn)物直接送大連寶生物公司測序。

1.6 限制性內(nèi)切酶分析

BIGH3 R555W位點突變產(chǎn)生一個新的限制性內(nèi)切酶位點，可被BstXⅠ識別(BstXⅠ識別序列為:CCANNNNN/NTGG);酶切反應體系20 μL，45 ℃ 3 h。

2 結(jié)果

2.1 K3和K12基因突變檢測

Meesmann角膜營養(yǎng)不良是由K3和K12基因突變所致，且目前發(fā)現(xiàn)的突變?nèi)糠植荚贙3和K12角蛋白高度保守區(qū)HIM(helix initiation motifs)和HTM(helix termination motif)區(qū)域[2，4]。首先篩查文獻已報道的K3和K12基因突變區(qū)域，即K12基因的外顯子1和外顯子6以及K3基因的外顯子7。DNA測序結(jié)果表明在這些區(qū)域沒有突變，進一步掃描K3和K12基因整個外顯子區(qū)域，也未發(fā)現(xiàn)突變。2004年隨訪，裂隙燈檢測發(fā)現(xiàn)癥狀發(fā)生改變，先證者的臨床表現(xiàn)可能為顆粒狀或Avellino角膜營養(yǎng)不良(圖2)。

2.2BIGH3基因突變檢測

PCR擴增BIGH3基因外顯子4和外顯子12，DNA直接測序分析，結(jié)果顯示患者(先證者Ⅱ7和Ⅲ1)在BIGH3基因的外顯子12發(fā)生雜合突變(CGG>TGG)，即BIGH3 R555W突變(圖3A);另外，在兩位患者的BIGH3基因外顯子12還發(fā)現(xiàn)一個多態(tài)位點(Phe540Phe)(圖3B);內(nèi)切酶BstXⅠ分析結(jié)果顯示該家系的BIGH3 R555W突變與疾病表現(xiàn)型呈完全共分離(圖3C)，表明該例Meesmann角膜營養(yǎng)不良家系屬顆粒狀角膜營養(yǎng)不良，且為BIGH3基因R555W突變雜合子。

3 討論

角膜營養(yǎng)不良一般依據(jù)病史和裂隙燈檢測可作出初步的臨床診斷，且主要按病變發(fā)生的解剖學部位將其分為前部、實質(zhì)部和后部角膜營養(yǎng)不良三類。然而，在進行性病變過程中，角膜營養(yǎng)不良還表現(xiàn)一個共同特點，即開始先侵犯角膜的某一層，晚期可波及鄰近層次，甚至影響全層角膜。因此， A:DNA測序分析突變位點; B:BIGH3單核苷酸多態(tài)性位點(T/C); C:限制性內(nèi)切酶BstXⅠ分析.

在臨床診斷分型，特別是晚期患者的診斷分型帶來很大的混淆。隨著角膜營養(yǎng)不良分子遺傳學的深人研究，以致病基因的分子特征作為臨床診斷和分類、分型的依據(jù)，其可靠性和準確性也得到了大大提高，并且越來越受到國內(nèi)外同行們的廣泛認可。

Meesmann角膜營養(yǎng)不良屬于前部角膜營養(yǎng)不良，臨床表現(xiàn)主要為角膜上皮層內(nèi)散在著無數(shù)細小圓形透明囊泡，是由K3或K12基因突變所致[2]。顆粒狀角膜營養(yǎng)不良屬實質(zhì)部角膜營養(yǎng)不良，依據(jù)角膜表征目前至少可以分為3種類型：Avellino角膜營養(yǎng)不良、典型顆粒狀角膜營養(yǎng)不良和淺表變異型顆粒狀角膜營養(yǎng)不良，分別是由于BIGH3基因的R124H、R555W和R124L突變所致[5]。目前，在世界各國的相關研究中均發(fā)現(xiàn)BIGH3基因的第4外顯子的R124和第12外顯子的R555為突變熱點;與BIGH3基因R555W突變相關的顆粒狀角膜營養(yǎng)不良患者在歐洲和美國較為常見，在日本卻較為少見[1]。

分子遺傳學分析結(jié)果顯示，筆者研究的家系受累患者存在BIGH3 R555W突變雜合子，突變與疾病表現(xiàn)型呈完全共分離，而在K3和K12基因沒有發(fā)現(xiàn)突變。因此，從基因突變分析結(jié)果可以確診該家系不屬于Meesmann角膜營養(yǎng)不良，而是典型的顆粒狀角膜營養(yǎng)不良。

據(jù)報道在該家系中先證者角膜病變開始發(fā)生于上皮層[3]，隨后波及角膜實質(zhì)部。因此，結(jié)合臨床癥狀與基因突變分析，該家系患者又可能是BIGH3 R555W雜合突變導致的角膜上皮層與基質(zhì)層先后受累的顆粒狀角膜營養(yǎng)不良，可歸于淺表變異型顆粒狀角膜營養(yǎng)不良。Escribano等研究表明角膜上皮細胞特異性高表達BIGH3基因[6];Hirano等認為BIGH3蛋白是由上皮細胞合成，內(nèi)皮細胞也可能合成BIGH3蛋白[7];Okada曾報道一種由BIGH3 R555W純合子突變導致的淺表變異顆粒狀角膜營養(yǎng)不良[8]。這些報道間接說明BIGH3 R555W雜合突變也又可能導致淺表變異型顆粒狀角膜營養(yǎng)不良。遺憾的是沒有先證者的早期裂隙燈照片及組織病理檢測來直接支持這種可能性。

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