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海洋深處范文第1篇

身懷絕技才能獲得食物

深海中大多數(shù)是海盆、海山環(huán)境，而這樣的環(huán)境中生物相對(duì)稀少，因此有人將深海稱為“海洋中的沙漠”，這里的動(dòng)物雖然個(gè)體比較少，但種類卻不少。

由于可獲取的食物來(lái)源有限，所以能夠在深海生活的動(dòng)物大都身懷絕技，在尋找食物時(shí)各顯神通。如深海魚類大多數(shù)都有一張巨大的嘴巴、又尖又長(zhǎng)的牙齒和一雙特別大的眼睛，一旦有其他魚類或者動(dòng)物被它們咬住，便在劫難逃，它們會(huì)死咬住獵物不放，直到將獵物吞噬消化掉。一頓大餐之后，它們可以很長(zhǎng)時(shí)間不進(jìn)食，然后抓緊時(shí)間繁育后代。

有的深海魚平時(shí)將身體埋在泥沙中，在嘴巴上方長(zhǎng)出一根長(zhǎng)柄，柄的末端有一個(gè)發(fā)光的小球，作為誘餌不停地?cái)[動(dòng)，吸引小魚或者其他小動(dòng)物前來(lái)，一旦進(jìn)入它的攻擊范圍，它便突然躍起，張開血盆大口將小魚一口吞掉。由于深海生物貧瘠，這些魚類獲得食物的機(jī)會(huì)也很小，因此它們被稱為機(jī)會(huì)主義者。

還有一些深海動(dòng)物靠濾食海水中的食物顆粒生活，如海綿、珊瑚、?？?。由于深海的海水中食物顆粒非常缺乏，很多濾食性的深海動(dòng)物和上述機(jī)會(huì)主義的捕食魚類的新陳代謝率都很低，生長(zhǎng)非常緩慢，所以很多深海動(dòng)物的壽命都非常長(zhǎng)。如有的海綿，經(jīng)過(guò)上萬(wàn)年才長(zhǎng)到一兩米長(zhǎng)。

適應(yīng)海洋環(huán)境的奇葩形態(tài)

為了適應(yīng)深海環(huán)境的特殊性，深海動(dòng)物也衍生出很多特殊的形態(tài)。當(dāng)然，不是所有深海生物都長(zhǎng)得丑陋，只是由于它們獲得食物的機(jī)會(huì)很小，所以許多深海魚長(zhǎng)著捕食需要的大嘴巴、長(zhǎng)牙齒，以保證不讓到口的獵物逃掉，它們的腹部都很小或者已經(jīng)退化。如冷泉和熱液口的生物群落優(yōu)勢(shì)種潛鎧蝦，由于其食物來(lái)源正是在它們的身體上生長(zhǎng)的化能微生物，因此潛鎧蝦不再需要利用視覺(jué)去尋找食物，因此其眼睛也在逐漸退化。更有一些海綿動(dòng)物，其形態(tài)看上去很像巖石。

身體的顏色能當(dāng)武器

深海在海水的真光層以下，完全沒(méi)有光線，可以說(shuō)是名副其實(shí)的黑暗世界。因此，有的深海動(dòng)物為了更好地求偶和尋找同伴，逐漸讓自己的體色呈現(xiàn)為在海水中傳播最遠(yuǎn)、最容易被同類發(fā)現(xiàn)的大紅色，而這類生物往往具有發(fā)達(dá)的視覺(jué)和比其淺海親戚更大的眼睛，如長(zhǎng)刺石蟹。

由于深海的食物稀缺，而制造體色的色素需要能量，也有許多深海動(dòng)物選擇不需要色素的白色來(lái)節(jié)省能量。有時(shí)候，同種深海動(dòng)物的生活范圍小，聚在一起，也不需要靠視覺(jué)去尋找同伴和食物，因此，有的深海動(dòng)物的體色也是純白色的，如白瓷蟹、海綿、珊瑚、?？确N類。有的深海動(dòng)物，為了躲避天敵，身體的大部或者全部呈透明色。有的深海動(dòng)物在其生活史的某個(gè)階段，如繁殖階段，還會(huì)發(fā)出五顏六色的生物光。 海葵

特殊的身體構(gòu)造

有人好奇深海動(dòng)物到淺?；蛘吆Ｃ婧髸?huì)不會(huì)脹爆？其實(shí)深海動(dòng)物的身體構(gòu)造都是內(nèi)外通透的。例如蠕蟲類的動(dòng)物海參，其身體是一個(gè)囊狀，但有口和兩個(gè)通道使其皮囊內(nèi)外相通，這樣深海水壓雖然很大，但海參身體內(nèi)外的壓力是相同的，因此即使到了淺海或者海面，其身體內(nèi)外的壓力同時(shí)變小，內(nèi)外壓仍然相同，所以不會(huì)爆裂。

甲殼動(dòng)物的蝦類和蟹類，其甲殼與身體的結(jié)合處本來(lái)就有很多軟組織作為通道，用來(lái)平衡身體內(nèi)外的水壓。而海綿動(dòng)物、腔腸動(dòng)物等，其身體上有大量的小孔作為通道，也不會(huì)因此而受到損傷。至于動(dòng)物體最小的組織單元細(xì)胞，雖然是一個(gè)微型的囊狀體，但其細(xì)胞膜上也有無(wú)數(shù)的小孔作為物質(zhì)交換的通道，可以傳遞水壓使細(xì)胞內(nèi)外的壓力平衡。

即使是海洋中的龐然大物抹香鯨，為了追蹤獵物，也可以在幾十分鐘內(nèi)一口氣從海面潛到 2 000多米的深海，是絕對(duì)的潛水冠軍，然而外部水壓變化巨大但抹香鯨卻毫發(fā)無(wú)損。雖然抹香鯨與人類一樣，也是用肺呼吸，但抹香鯨已經(jīng)適應(yīng)了海洋的捕獵生活，在上浮時(shí)有特殊的釋放肺部空氣壓力的機(jī)制，因此不會(huì)因?yàn)樗畨鹤兓鴵p傷肺部。

深海里衍生的奇特行為

海洋深處范文第2篇

這幾天，小布一直在寫區(qū)塊鏈技術(shù)相關(guān)的行業(yè)落地訊息。但是寫了這么多行業(yè)，其實(shí)最終區(qū)塊鏈技術(shù)解決的都是一個(gè)問(wèn)題：信任。

2017年下旬，眾安科技聯(lián)合連陌科技等合作伙伴，推出“步步雞”品牌，將區(qū)塊鏈、人工智能、物聯(lián)網(wǎng)等技術(shù)應(yīng)用在農(nóng)業(yè)養(yǎng)殖上。其產(chǎn)品“步步雞”成為網(wǎng)紅，價(jià)格賣到239元一只。

“步步雞”項(xiàng)目利用物聯(lián)網(wǎng)+區(qū)塊鏈技術(shù)，從雞苗供應(yīng)、養(yǎng)殖、檢疫，到屠宰、物流等環(huán)節(jié)的信息進(jìn)行真實(shí)的記錄且不可篡改。每只雞都配備一只運(yùn)動(dòng)腳環(huán)，也就是“雞牌”，相當(dāng)于一張具有唯一標(biāo)示的“身份證”。它除了能夠詳細(xì)記錄雞的日齡、產(chǎn)地信息、防疫情況等基本信息外，還可以實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)記錄雞只地理位置和計(jì)步信息。

為什么養(yǎng)雞還要這么大費(fèi)周章？那“雞牌”又解決了什么樣的一個(gè)問(wèn)題呢？

當(dāng)然是目前普遍存在的信任危機(jī)。在食品行業(yè)，從劣質(zhì)油到“外賣工廠”等等，如果沒(méi)有親眼看到整個(gè)過(guò)程，你永遠(yuǎn)不知道你所吃的是怎么被加工出來(lái)的。菜市場(chǎng)那些生鮮活禽，誰(shuí)也不知道是不是激素養(yǎng)大的。而區(qū)塊鏈技術(shù)的應(yīng)用，就是解決信任危機(jī)的有效方式，它的一大特質(zhì)就是去信任。

市場(chǎng)信任既然如此困難，那就直接去掉信任，代以一種完善的規(guī)則來(lái)運(yùn)行，并且此規(guī)則將消除所有的信息不對(duì)稱，保障交易平等又很好的保護(hù)交易人隱私。而區(qū)塊鏈的去中心化，又使得沒(méi)有任何一個(gè)人可以強(qiáng)大到改變這個(gè)規(guī)則，公信力如天網(wǎng)一樣，誰(shuí)都無(wú)法接觸卻又無(wú)處不在的發(fā)揮效力。

從消費(fèi)者端看，通過(guò)區(qū)塊鏈技術(shù)可以滿足知情權(quán)，選擇自己信任的農(nóng)產(chǎn)品；從采購(gòu)商角度來(lái)講，擔(dān)心批量購(gòu)買的農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量不好，則可以通過(guò)對(duì)種植過(guò)程以及大數(shù)據(jù)分析，選擇信任的農(nóng)戶。

關(guān)于農(nóng)業(yè)+區(qū)塊鏈，還是可以期待的。除了養(yǎng)雞，區(qū)塊鏈將會(huì)在物聯(lián)網(wǎng)農(nóng)業(yè)、農(nóng)產(chǎn)品溯源、農(nóng)村金融等6大領(lǐng)域大有作為。

1．物聯(lián)網(wǎng)

目前制約農(nóng)業(yè)物聯(lián)網(wǎng)大面積推廣的主要因素就是應(yīng)用成本和維護(hù)成本高、性能差。而且物聯(lián)網(wǎng)是中心化管理，隨著物聯(lián)網(wǎng)設(shè)備的暴增，數(shù)據(jù)中心的基礎(chǔ)設(shè)施投入與維護(hù)成本難以估量。

物聯(lián)網(wǎng)和區(qū)塊鏈的結(jié)合將使這些設(shè)備實(shí)現(xiàn)自我管理和維護(hù)，這就省去了以云端控制為中心的高昂的維護(hù)費(fèi)用，降低互聯(lián)網(wǎng)設(shè)備的后期維護(hù)成本，有助于提升農(nóng)業(yè)物聯(lián)網(wǎng)的智能化和規(guī)?；?。

2．大數(shù)據(jù)

傳統(tǒng)數(shù)據(jù)庫(kù)的三大成就，關(guān)系模型、事務(wù)處理、查詢優(yōu)化。數(shù)據(jù)庫(kù)技術(shù)在不停發(fā)展，未來(lái)隨著農(nóng)業(yè)大數(shù)據(jù)采集體系的建立，如何以規(guī)?；姆绞絹?lái)解決數(shù)據(jù)的真實(shí)性和有效性，將是全社會(huì)面臨的難題。

以區(qū)塊鏈為代表的技術(shù)，對(duì)數(shù)據(jù)真實(shí)有效不可偽造、無(wú)法篡改的這些要求，相對(duì)于現(xiàn)在的數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)講，是一個(gè)新的起點(diǎn)。

3．質(zhì)量安全追溯

農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化過(guò)程中，生產(chǎn)地和消費(fèi)地距離遠(yuǎn)，消費(fèi)者對(duì)生產(chǎn)者使用的農(nóng)藥、化肥以及運(yùn)輸、加工過(guò)程中使用的添加劑等信息根本無(wú)從了解，消費(fèi)者對(duì)生產(chǎn)的信任度降低。

基于區(qū)塊鏈技術(shù)的農(nóng)產(chǎn)品追溯系統(tǒng)，所有的數(shù)據(jù)一旦記錄到區(qū)塊鏈賬本上將不能被改動(dòng)，依靠不對(duì)稱加密和數(shù)學(xué)算法的先進(jìn)科技從根本上消除了人為因素，使得信息更加透明。

4．農(nóng)村金融

農(nóng)民貸款整體上比較難，主要原因是缺乏有效抵押物，歸根到底就是缺乏信用抵押機(jī)制。區(qū)塊鏈技術(shù)公開、不可篡改的屬性，為去中心化的信任機(jī)制提供了可能。

當(dāng)新型農(nóng)業(yè)經(jīng)營(yíng)主體申請(qǐng)貸款時(shí)，需要提供相應(yīng)的信用信息，這就需要依靠銀行、保險(xiǎn)或征信機(jī)構(gòu)所記錄的相應(yīng)信息數(shù)據(jù)。但其中存在著信息不完整、數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、使用成本高等問(wèn)題。而區(qū)塊鏈的用處在于依靠程序算法自動(dòng)記錄海量信息，并存儲(chǔ)在區(qū)塊鏈網(wǎng)絡(luò)的每一臺(tái)電腦上，信息透明、篡改難度高、使用成本低。因此，申請(qǐng)貸款時(shí)不再依賴銀行、征信公司等中介機(jī)構(gòu)提供信用證明，貸款機(jī)構(gòu)通過(guò)調(diào)取區(qū)塊鏈的相應(yīng)信息數(shù)據(jù)即可。

5．農(nóng)業(yè)保險(xiǎn)

農(nóng)業(yè)保險(xiǎn)品種小、覆蓋范圍低，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)騙保事件。將區(qū)塊鏈與農(nóng)業(yè)保險(xiǎn)結(jié)合之后，農(nóng)業(yè)保險(xiǎn)在農(nóng)業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)和農(nóng)業(yè)產(chǎn)權(quán)交易方面將有很大的提升空間，而且會(huì)極大的簡(jiǎn)化農(nóng)業(yè)保險(xiǎn)流程。

另外，因?yàn)橹悄芎霞s是區(qū)塊鏈的一個(gè)重要概念，所以將智能合約概念用到農(nóng)業(yè)保險(xiǎn)領(lǐng)域，會(huì)讓農(nóng)業(yè)保險(xiǎn)賠付更加智能化。以前如果發(fā)生大的農(nóng)業(yè)自然災(zāi)害，相應(yīng)的理賠周期會(huì)比較長(zhǎng)。將智能合約用到區(qū)塊鏈之后，一旦檢測(cè)到農(nóng)業(yè)災(zāi)害，就會(huì)自動(dòng)啟動(dòng)賠付流程，這樣賠付效率更高。

6．供應(yīng)鏈

海洋深處范文第3篇

1、魚。養(yǎng)魚是投入較小，花費(fèi)精力時(shí)間較少的一項(xiàng)活動(dòng)。魚不像貓狗一樣時(shí)常需要人陪伴，食量也不大，更重要的是占地面積小且安靜，還有觀賞價(jià)值，實(shí)在是使人靜心的寵物；

2、兔子。養(yǎng)兔子的優(yōu)點(diǎn)在于干凈，可訓(xùn)練上廁所，無(wú)體味，無(wú)需每天外出遛彎，體積小，喂養(yǎng)方便不需要煮飯，安靜，萌點(diǎn)滿滿；

3、倉(cāng)鼠。養(yǎng)倉(cāng)鼠有點(diǎn)在于倉(cāng)鼠食量小，安靜，愛(ài)干凈，體型小，與人親近，不會(huì)給人帶來(lái)傷害，攜帶病毒少；

4、貓。貓性情溫文爾雅，善解人意，喜歡與人親近。叫聲尖細(xì)柔美，愛(ài)撒嬌，舉止風(fēng)度翩翩，天生一副嬌生慣養(yǎng)之態(tài)，給人一種華麗高貴的感覺(jué)；

海洋深處范文第4篇

近期這類唱多印度互聯(lián)網(wǎng)業(yè)的文章很多，不知什么時(shí)候開始，遠(yuǎn)見(jiàn)卓識(shí)的互聯(lián)網(wǎng)觀察者們都不約而同的發(fā)現(xiàn)了印度這個(gè)大金礦：他們認(rèn)為印度“像是五年前的中國(guó)，無(wú)數(shù)的機(jī)會(huì)等待被發(fā)掘”。

馬衡達(dá)集團(tuán)總裁、印度企業(yè)家Manoj Chugh透露，曾經(jīng)有西方人問(wèn)他，阿里巴巴是不是印度企業(yè)，因?yàn)槲鞣饺苏J(rèn)為“阿里巴巴”的故事應(yīng)該來(lái)自印度。

可是，到目前為止，印度為什么沒(méi)出現(xiàn)BAT這樣的巨頭公司?從宏觀經(jīng)濟(jì)環(huán)境，用戶基數(shù)，人才儲(chǔ)備，政策環(huán)境等方面來(lái)對(duì)比中國(guó)和印度的互聯(lián)網(wǎng)業(yè)，或許可以找到一些答案。

第一、宏觀經(jīng)濟(jì)層面。印度的宏觀經(jīng)濟(jì)實(shí)力遠(yuǎn)遠(yuǎn)弱于中國(guó)。

今天的印度，按照人均GDP計(jì)算，在全球199個(gè)被納入統(tǒng)計(jì)的國(guó)家中，印度只排在127位。盡管就在一個(gè)月前，印度財(cái)政部長(zhǎng)阿倫·賈伊特利預(yù)測(cè)說(shuō)，2014年印度經(jīng)濟(jì)增速將達(dá)到7.5%。但是即使再給印度5年時(shí)間，其人均GDP依然無(wú)法趕上中國(guó)2008年的水準(zhǔn)。

印度人的平均生產(chǎn)總值和消費(fèi)水平?jīng)Q定了越是廉價(jià)產(chǎn)品在印度越受歡迎，互聯(lián)網(wǎng)產(chǎn)品利潤(rùn)會(huì)相對(duì)較低，市值也不會(huì)太高。

第二、市場(chǎng)規(guī)模層面。印度市場(chǎng)規(guī)模遠(yuǎn)小于中國(guó)。

中國(guó)是一個(gè)全球少有的統(tǒng)一市場(chǎng)，中國(guó)歷史就是大一統(tǒng)的歷史。

在互聯(lián)網(wǎng)的市場(chǎng)規(guī)模上，中國(guó)電子商務(wù)的市場(chǎng)已經(jīng)追上美國(guó)，中國(guó)游戲市場(chǎng)的規(guī)模已經(jīng)追上美國(guó)。印度經(jīng)濟(jì)和中國(guó)相比是有很大不同的，印度12億人口中講英語(yǔ)的估計(jì)僅有10%。印度紛雜的語(yǔ)言在移動(dòng)設(shè)備上操作起來(lái)會(huì)非常糟糕。

第三、用戶基數(shù)層面。印度用戶基數(shù)遠(yuǎn)小于中國(guó)。

有觀點(diǎn)認(rèn)為，印度互聯(lián)網(wǎng)用戶基數(shù)大。印度互聯(lián)網(wǎng)用戶約為3億，多數(shù)分析師認(rèn)為，到2020年這個(gè)數(shù)字將超過(guò)5億，僅次于中國(guó)。

但是，在印度，依然有超過(guò)3億人口生活在貧困線以下，而每年還有新的1500萬(wàn)勞動(dòng)力大軍需要吃飯。而據(jù)工信部網(wǎng)站數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)移動(dòng)互聯(lián)網(wǎng)用戶數(shù)達(dá)8.38億。

第四、政策層面。中國(guó)互聯(lián)網(wǎng)的政策限制給了BAT崛起的機(jī)會(huì)。

眾所周知，中國(guó)互聯(lián)網(wǎng)由于存在政策限制，使得Google、Facebook這樣的海外互聯(lián)網(wǎng)巨頭很難輕易進(jìn)入中國(guó)，正是他們?cè)谥袊?guó)市場(chǎng)的缺位，使得百度和騰訊有了極大的發(fā)展空間。

而印度那些本來(lái)很弱小的互聯(lián)網(wǎng)創(chuàng)業(yè)公司，時(shí)刻面臨著美國(guó)互聯(lián)網(wǎng)巨頭的入侵，互聯(lián)網(wǎng)的本質(zhì)是贏者通吃，當(dāng)你可以直接訪問(wèn)Google、YouTube、Facebook、Twitter、Amazon這些網(wǎng)站，你覺(jué)得BAT還有活路嗎?此外，印度是英語(yǔ)國(guó)家，特別是能夠上網(wǎng)的人群，更是英語(yǔ)為主。

第五、互聯(lián)網(wǎng)精神內(nèi)核層面。印度和中國(guó)相比最核心的一個(gè)問(wèn)題是互聯(lián)網(wǎng)文化的淪陷。

據(jù)媒體報(bào)道，印度移動(dòng)互聯(lián)網(wǎng)項(xiàng)目大多是照搬美國(guó)已有的項(xiàng)目，接地氣的改動(dòng)不多。我在知乎上看到一種說(shuō)法很有趣，也非常贊同，在此拿來(lái)引用一下，“最核心的一個(gè)問(wèn)題是互聯(lián)網(wǎng)文化的淪陷。這樣的淪陷是全方位的，從互聯(lián)網(wǎng)用戶的語(yǔ)言偏好，到用戶的剛需，甚至用戶的職業(yè)，用戶的產(chǎn)品?；仡橞AT，雖然橫向和國(guó)外的巨頭對(duì)比，在一些功能上有缺陷，但他們最核心，最共通的一點(diǎn)就是，全都是中國(guó)互聯(lián)網(wǎng)特色精神，特色文化，特色產(chǎn)品的代表?！?/p>

這位網(wǎng)友概括得非常好：只有先是中國(guó)的，才有可能變成世界的。先是世界的，就沒(méi)有中國(guó)的了。而印度恰恰就走向了這第二條路。

第六、創(chuàng)業(yè)生態(tài)層面。和中國(guó)相比，印度的創(chuàng)業(yè)生態(tài)積累缺位。

資料顯示，2009年中國(guó)本土之所以能夠涌現(xiàn)出大批移動(dòng)互聯(lián)網(wǎng)公司，在于從1998年第一波互聯(lián)網(wǎng)創(chuàng)業(yè)浪潮開始，中國(guó)的互聯(lián)網(wǎng)創(chuàng)業(yè)生態(tài)就在不斷成型，這個(gè)生態(tài)中有成功的連續(xù)創(chuàng)業(yè)者、VC、天使投資人創(chuàng)業(yè)公司、成熟的互聯(lián)網(wǎng)大公司……而在印度，這樣的積累和生態(tài)體系和是缺位的，在這片創(chuàng)業(yè)荒漠上，此前只是屹立著鳳毛麟角的幾家大型IT外包服務(wù)商。

第七、基建層面。多年來(lái)，印度基礎(chǔ)設(shè)施發(fā)展一直滯后。

對(duì)于印度互聯(lián)網(wǎng)業(yè)來(lái)說(shuō)，“要想富先修路”這句話同樣成立。

印度獨(dú)立后一直采用政府集中管理的方式進(jìn)行基礎(chǔ)設(shè)施開發(fā)、建設(shè)和管理，但十分低效。這導(dǎo)致物流成為制約電商發(fā)展的最大短板世界經(jīng)濟(jì)論壇最近一項(xiàng)《國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力報(bào)告》顯示，印度基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè)水平在148個(gè)國(guó)家中排名第85，兩個(gè)最大的城市新德里和孟買均排名落后于北京和曼谷。

海洋深處范文第5篇

【摘要】 目的 探討二氮嗪(DZ)預(yù)處理能否抑制CJun氨基末端激酶(JNK)表達(dá)而減輕缺氧復(fù)氧后大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。 方法 原代培養(yǎng)9～10 d的SD大鼠海馬神經(jīng)元隨機(jī)分為5組：對(duì)照組、DZ 0，30，100 μmol/L和DZ 100 μmol/L+5羥癸酸(5HD)100 μmol/L預(yù)處理組。除對(duì)照組外，其余4組神經(jīng)元自缺氧前2 d開始，每天實(shí)施以上對(duì)應(yīng)濃度DZ預(yù)處理1 h，連續(xù)3 d。于體外缺氧4 h復(fù)氧48 h后，采用四唑藍(lán)比色法測(cè)定海馬神經(jīng)元活力，AnnexinⅤFITC流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定凋亡率，Western blotting法檢測(cè)JNK蛋白表達(dá)。 結(jié)果 與對(duì)照組比較，缺氧復(fù)氧后海馬神經(jīng)元的活力下降，凋亡率增大，JNK蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P

【關(guān)鍵詞】 二氮嗪; 海馬; 疾病模型，動(dòng)物; 缺氧缺血，腦; 神經(jīng)元; 細(xì)胞凋亡; JNK絲裂原活化蛋白激酶類

以二氮嗪(Diazoxide，DZ)為代表的線粒體內(nèi)膜上ATP敏感鉀通道(Mitochondrial ATP Sensitive Potassium Channel， MitoKATP)開放劑可模擬缺血預(yù)處理，激發(fā)腦的內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制而增強(qiáng)抗損傷效果[12]。腦損傷患者的愈后與凋亡密切相關(guān)。cJun氨基末端激酶 (cJun Nterminal kinase，JNK)是有絲分裂原激活蛋白激酶超家族成員之一，具有促凋亡和抗凋亡的雙重功能，發(fā)揮哪一功能受到細(xì)胞類型、刺激方式、持續(xù)時(shí)間以及其他信號(hào)的影響，在離體培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元缺氧實(shí)驗(yàn)中，JNK信號(hào)主要發(fā)揮促凋亡作用[34]。本研究以原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探討DZ預(yù)處理能否抑制JNK信號(hào)蛋白表達(dá)而減低缺氧復(fù)氧后大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡，旨在進(jìn)一步了解藥物預(yù)處理的抗損傷機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要藥品、試劑和儀器 二氮嗪(批號(hào)：022K1516)、5羥癸酸(5Hydroxydecanoate，5HD，批號(hào)：057H5076)購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;Annexin ⅤFITC試劑為美國(guó)BD公司產(chǎn)品;多克隆兔抗大鼠JNK抗體(FL型SC57)、山羊抗兔IgG抗體購(gòu)自美國(guó)Santa cruz公司。密閉缺氧裝置為北京通達(dá)科技公司產(chǎn)品;電泳儀(MiniProtean3，美國(guó)Amersham Biosciences公司);酶標(biāo)儀(Model 550，美國(guó)BioRad公司);凝膠成像系統(tǒng)(Gel Doc XR+，美國(guó)BioRad公司);流式細(xì)胞儀(FACS Calibur，美國(guó)BD公司)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng)和鑒定 取新生SD大鼠〔出生時(shí)間

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組、缺氧方法和DZ預(yù)處理方法 大鼠海馬神經(jīng)元分為對(duì)照組(A組)、DZ 0 μmol/L組(B組)、DZ 30 μmol/L組(C組)、DZ 100 μmol/L組(D組)、DZ 100 μmol/L+5HD 100 μmol/L(E組)。每次實(shí)驗(yàn)每組采用12孔或2皿，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。除對(duì)照組外，其他組于缺氧前2 d開始，每天實(shí)施以上對(duì)應(yīng)濃度DZ預(yù)處理，每次1 h，隨后培養(yǎng)液全量置換，連續(xù)3 d。將海馬神經(jīng)元置入密閉缺氧裝置中后，充體積分?jǐn)?shù)為0.95的N20.05的CO2氣體4 h，流速為0.2 L/min，以造成缺氧環(huán)境，于復(fù)氧48 h測(cè)定相關(guān)指標(biāo)。

1.2.3 四唑藍(lán)比色法測(cè)定神經(jīng)元活力 96孔板之每孔中加入5 mg/mL四甲基偶氮唑藍(lán)磷酸緩沖液10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄去上清液，再加入100 μL二甲基亞砜均勻振蕩10 min，在酶標(biāo)儀(測(cè)量波長(zhǎng)600 nm)上讀取數(shù)值為吸光度值，以吸光度值表示海馬神經(jīng)元的活力。

1.2.4 Annexin VFITC法檢測(cè)神經(jīng)元凋亡率 海馬神經(jīng)元按以下程序處理：0.1 mol/L PBS漂洗后，0.125%胰蛋白酶消化5 min，終止消化后制備單細(xì)胞懸液，收集細(xì)胞并離心(1 000 r/min)5 min，棄去胰蛋白酶后，0.1 mol/L PBS漂洗2次，以含Ca2+緩沖液將神經(jīng)元濃度稀釋為1×106 mL1，加Annexin V(1∶20)避光反應(yīng)10 min，再以PI(1∶20)標(biāo)記后，立即在流式細(xì)胞儀上測(cè)定凋亡率。

1.2.5 Western blot檢測(cè)JNK蛋白的表達(dá) 采集細(xì)胞后，1 200 r/min離心5 min收集細(xì)胞，加入80 μL細(xì)胞裂解液，冰上裂解30 min后，4 ℃再離心(12 000 r/ min)5 min。上樣前將樣品煮沸5 min，計(jì)算含50 μg蛋白的溶液體積即為上樣量。垂直電泳兩玻璃板間隙中灌注12%分離膠及5%濃縮膠，加入Marker 10 μL，其余空格按預(yù)定順序加樣。電泳在濃縮膠電壓80 V，分離膠電壓100 V，總時(shí)間2.5 h左右;而后在4 ℃、電流200 mA條件下轉(zhuǎn)膜45～60 min，將蛋白轉(zhuǎn)移至NC膜，10%脫脂牛奶封閉NC膜2 h，將多克隆兔抗大鼠JNK抗體(1∶500)與NC膜充分接觸雜交，4 ℃下過(guò)夜，后與βactin(1∶1 000)雜交反應(yīng)3～5 h，再與山羊抗兔IgG抗體二抗(1∶2 000)于室溫下孵育2 h，然后顯影、定影、圖象分析。結(jié)果用Gel Doc凝膠成像分析系統(tǒng)掃描目標(biāo)條帶的分子量，成像結(jié)果用Quantity One軟件行半定量分析，以A組為對(duì)照，取相對(duì)值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 計(jì)量資料以x±s表示，采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。單因素方差分析，Newmankeuls兩兩比較。P

2 結(jié) 果

2.1 海馬神經(jīng)元的鑒定結(jié)果及活力、凋亡率比較 光鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)8個(gè)非重疊視野細(xì)胞，計(jì)算NSE陽(yáng)性細(xì)胞百分率，海馬神經(jīng)元所占比例為(87.7±5.6)%，見(jiàn)圖1。缺氧復(fù)氧后海馬神經(jīng)元活力下降，凋亡率增大(P

2.2 JNK蛋白的定量分析 缺氧復(fù)氧后，JNK蛋白表達(dá)增強(qiáng)。與B組比較，C和D組JNK表達(dá)均明顯減弱(P0.05)。與C組比較，D組的JNK表達(dá)減弱(P

3 討 論

腦缺血/缺氧嚴(yán)重危害人類健康，積極探索缺血/缺氧導(dǎo)致腦損傷機(jī)制和有效防治措施，具有重要的臨床價(jià)值。在腦內(nèi)，MitoKATP含量極為豐富，DZ激活MitoKATP后能產(chǎn)生理想的保護(hù)效果。本研究中DZ預(yù)處理的劑量、時(shí)間、方法和5HD劑量是根據(jù)前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)確定的[5]。應(yīng)用四唑藍(lán)比色法測(cè)定活細(xì)胞的吸光密度值代表細(xì)胞的活力，可以反映海馬神經(jīng)元的存活率。缺氧復(fù)氧損傷后，DZ 100 μmol/L組活力大于DZ 0 μmol/L組、凋亡率低于DZ 0 μmol/L組;而DZ+5HD組與DZ 0 μmol/L組的活力和凋亡率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以上說(shuō)明DZ 100 μmol/L可通過(guò)開放MitoKATP通道誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元產(chǎn)生缺氧耐受。已知的主要機(jī)制是，開放MitoKATP可降低線粒體膜電位，線粒體適度去極化，抑制細(xì)胞質(zhì)鈣離子向線粒體內(nèi)流，減輕線粒體內(nèi)鈣超載[6];限制缺氧/缺血后線粒體的腫脹，使線粒體的體積保持在適當(dāng)范圍內(nèi)以維持線粒體內(nèi)電子傳遞和能量生成[7];MitoKATP的活化還可以減少細(xì)胞色素C的釋放，誘導(dǎo)Bcl2表達(dá)增加，抑制Bax易位，抑制凋亡發(fā)生[5]。實(shí)驗(yàn)中，DZ 30 μmol/L組與DZ 0 μmol/L組的活力、凋亡率比較均未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這同時(shí)提示DZ發(fā)揮預(yù)處理效應(yīng)與劑量有關(guān)。

JNK為54kD的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，含雙磷酸化功能區(qū)ThrProTyr，可與cJun N端的活化區(qū)結(jié)合并使其第63、73位絲氨酸殘基磷酸化，因而又被稱為cJUN氨基末端激酶。目前認(rèn)為，JNK可通過(guò)以下途徑發(fā)揮促凋亡作用[810]：增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物AP1的活性從而促進(jìn)多種凋亡蛋白表達(dá);磷酸化并抑制線粒體膜上的Bcl2和Bclxl，線粒體膜上PT孔開放，釋放cytc入細(xì)胞質(zhì);刺激下游底物Bim，將信號(hào)傳到Bax，也可導(dǎo)致線粒體釋放cytc。本實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組比較，缺氧復(fù)氧后各組JNK蛋白表達(dá)程度明顯增強(qiáng)的同時(shí)，凋亡率增大，存活率下降，提示JNK信號(hào)通路可能參與了缺氧復(fù)氧損傷所致的細(xì)胞凋亡損傷過(guò)程。與DZ 0 μmol/L組比較，DZ 100 μmol/L組JNK蛋白表達(dá)明顯減弱，凋亡率下降，活力升高;而給予MitoKATP 通道的選擇性抑制劑5HD后，以上變化被消除，提示DZ預(yù)處理可能通過(guò)抑制JNK活性表達(dá)，減輕凋亡發(fā)生。Jiang等在對(duì)新生大鼠海馬和皮質(zhì)缺血/缺氧的研究中，發(fā)現(xiàn)DZ預(yù)處理能抑制細(xì)胞核JNK的底物cJun蛋白的表達(dá)增加[11]。盡管DZ 30 μmol/L和DZ 100 μmol/L組的JNK蛋白表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但此2組之間的凋亡率和活力比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，這可能是缺氧復(fù)氧后神經(jīng)元的凋亡同時(shí)受多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控，受其他因素的干擾，DZ 30 μmol/L未能有效減低凋亡率。

筆者認(rèn)為，JNK信號(hào)在誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡過(guò)程中起重要作用，DZ可能抑制JNK的表達(dá)而減低缺氧復(fù)氧后大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。但DZ如何抑制JNK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，JNK出現(xiàn)的高峰及與細(xì)胞凋亡的具體關(guān)聯(lián)，尚需進(jìn)一步研究。

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