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本文作者：陳鑫王延偉作者單位：中國人民解放軍第210醫(yī)院檢驗(yàn)科

fcm在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用

由于人體中正常細(xì)胞大部分都是以二倍體存在，正常細(xì)胞在發(fā)生癌變時(shí)DNA數(shù)量會(huì)發(fā)生變化。FCM可以檢測細(xì)胞中DNA的含量變化從而運(yùn)用于腫瘤的檢測，在病理形態(tài)學(xué)診斷上一直把FCM技術(shù)視為腫瘤診斷的一個(gè)“金標(biāo)準(zhǔn)”。但由于癌癥早期缺乏客觀明確的診斷指標(biāo)，給治療工作帶來很大困擾，F(xiàn)CM的出現(xiàn)使腫瘤治療有了質(zhì)的飛躍。其應(yīng)用主要是通過測定DNA含量實(shí)現(xiàn)的，包括癌前病變檢查、早期癌變的檢出、化療指導(dǎo)以及預(yù)后評(píng)估等［6］。FCM檢測標(biāo)本包括實(shí)體瘤標(biāo)本或穿刺標(biāo)本、胸腹腔液體、膀胱沖洗液、尿液、食管鏡及支氣管鏡鉗取的少量活檢組織等。DNA非整倍體的出現(xiàn)是癌變的一個(gè)重要標(biāo)志。因此，臨床上可利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞周期分析和DNA倍體分析。輔助腫瘤診斷，包括監(jiān)測癌前病變、腫瘤的早期診斷、交界性腫瘤診斷和腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷等［7］，比如通過流式細(xì)胞儀檢測樣品中染色體的數(shù)量來實(shí)現(xiàn)甲狀腺對比分析染色體中的整倍體和異倍體的改變情況，從而實(shí)現(xiàn)對甲狀腺乳頭狀瘤的診斷［8］。根據(jù)細(xì)胞周期分析結(jié)果，適當(dāng)選用周期特異性藥物或非周期特異性藥物，可協(xié)助擬定治療方案;化療過程中腫瘤細(xì)胞DNA含量分布直方圖的變化，可反映細(xì)胞動(dòng)力學(xué)的變化，作為評(píng)估藥物療效的依據(jù)［9］。大量臨床實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證實(shí)，F(xiàn)CM在腫瘤學(xué)檢驗(yàn)診斷方面的準(zhǔn)確率很高，可以達(dá)到一般的細(xì)胞診斷。由于它具有自動(dòng)化和處理量大的優(yōu)點(diǎn)，因此已經(jīng)逐漸成為腫瘤診斷學(xué)方面的首選工具。另外，F(xiàn)CM在評(píng)價(jià)B細(xì)胞淋巴瘤方面具有重要的臨床意義。由于B細(xì)胞根據(jù)成熟度不同可以分為B淋巴母細(xì)胞、成熟細(xì)胞及漿細(xì)胞，而不同細(xì)胞和不同的疾病中所表達(dá)出來的抗原不同，因此可以通過不同抗原染色達(dá)到免疫分型的作用，從而診斷出腫瘤細(xì)胞的不同亞型，有助于選擇正確的治療方案［10］。

FCM在血液學(xué)中的應(yīng)用

FCM在各種血液病的診斷、治療和預(yù)后判斷方面也起到了十分重要的作用，主要是通過分析外周血細(xì)胞或骨髓細(xì)胞表面抗原和DNA的檢測來實(shí)現(xiàn)的。由于不同的血細(xì)胞系統(tǒng)都有其特有的表面抗原，F(xiàn)CM通過采用特異的單克隆抗體，借助于不同的熒光染料可同時(shí)檢測一個(gè)單細(xì)胞的不同參數(shù)，根據(jù)所測的參數(shù)結(jié)果來判斷出該血細(xì)胞的屬性。在各種急性白血病的診斷和鑒別中，一般形態(tài)學(xué)檢查很難區(qū)分，而FCM就起到了舉足輕重的作用。FCM在白血病免疫分型應(yīng)用方面也起到重要的作用。目前國內(nèi)外均主張采用FCMCD45/SSC雙參數(shù)散點(diǎn)網(wǎng)設(shè)計(jì)方法進(jìn)行白血病免疫分型。該方法可以將骨髓細(xì)胞清晰地分成淋巴細(xì)胞、成熟粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、幼稚細(xì)胞和有核紅細(xì)胞群，排除了正常細(xì)胞對免疫分型的干擾，使細(xì)胞免疫分型的準(zhǔn)確性大大提高［11］。FCM在血小板相關(guān)疾病的診斷中也有許多應(yīng)用。當(dāng)受到外界刺激時(shí)血小板會(huì)被活化而發(fā)生一系列改變。從血小板膜的糖蛋白表達(dá)水平的高低可判斷血小板的活化程度，F(xiàn)CM通過測定血小板膜糖蛋白的表達(dá)情況來為血小板膜糖蛋白異常所致疾病的診斷提供依據(jù)。在血栓性疾病的診斷和治療中，這種測定可以評(píng)價(jià)活化血小板程度在血栓性疾病和血栓前狀態(tài)發(fā)生、發(fā)展中的作用［12］。FCM在血液學(xué)中的臨床應(yīng)用主要包括:白血病的檢測、淋巴瘤的檢測、混合性白血病、部分髓系白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、微小殘留病灶白血病、血小板相關(guān)疾病等方面［13］。此外，在網(wǎng)織紅細(xì)胞、微小殘留病灶的檢測等方面，F(xiàn)CM均有廣泛應(yīng)用。

FCM在免疫學(xué)中的應(yīng)用

機(jī)體是否患病的一個(gè)重要指標(biāo)是免疫狀態(tài)是否正常，F(xiàn)CM技術(shù)目前已廣泛用來監(jiān)測機(jī)體的免疫狀態(tài)，T、B和自然殺傷淋巴細(xì)胞的水平是檢驗(yàn)免疫狀態(tài)的一個(gè)重要指標(biāo)。其中T細(xì)胞主要包括Th和Ts兩個(gè)細(xì)胞亞群，Th細(xì)胞是T細(xì)胞中表面分化抗原簇標(biāo)志為CD4+的一種亞群，而Th細(xì)胞是以CD8+為表面主要標(biāo)志的T細(xì)胞。CD16和CD56等是自然殺傷細(xì)胞的表面主要標(biāo)志;CD19是B細(xì)胞的表面標(biāo)志［14］。通過表面標(biāo)志物質(zhì)監(jiān)測各細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)各種細(xì)胞因子在體內(nèi)的水平，以及對患者淋巴細(xì)胞各亞群數(shù)量的測定，可監(jiān)控患者的免疫狀態(tài)，并作為診斷、治療相關(guān)疾病的重要依據(jù)。FCM結(jié)合單克隆抗體技術(shù)與普通免疫學(xué)相比具有定量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，在免疫學(xué)臨床主要應(yīng)用于對細(xì)胞表面抗原、細(xì)胞內(nèi)抗原、細(xì)胞膜受體和癌基因蛋白進(jìn)行定量檢測，并且已經(jīng)取得了長足的發(fā)展。FCM結(jié)合單克隆抗體技術(shù)在人體細(xì)胞免疫功能方面的評(píng)估具有重要的意義。有報(bào)道對外周血淋巴細(xì)胞免疫表型的參考值及其種族、性別、年齡等影響因素進(jìn)行了探討［15］。

FCM在其他方面的應(yīng)用

1FCM在器官移植中的作用

在器官移植中，F(xiàn)CM可被用來判斷供者與受者配型是否合適，并鑒別和定型同種異體反應(yīng)抗體。FCM還可通過監(jiān)測移植后免疫表型的變化來預(yù)測移植后的免疫排斥反應(yīng)、細(xì)胞免疫治療效果以及移植的存活情況等，可以更敏感地預(yù)測排斥反應(yīng)的發(fā)生，從而為臨床治療提供有效依據(jù)［16］。

2FCM在細(xì)胞凋亡方面的作用

FCM是目前應(yīng)用較多的對細(xì)胞凋亡進(jìn)行分析和檢測的方法，結(jié)合熒光染色，可對單細(xì)胞做多參數(shù)分析。FCM除了可以定量監(jiān)測細(xì)胞凋亡數(shù)和凋亡指數(shù)外，還可同時(shí)測定凋亡細(xì)胞發(fā)生于某個(gè)特定的細(xì)胞周期;通過測定細(xì)胞的增殖率與死亡率，可以早期測定藥物的療效。FCM技術(shù)在細(xì)胞凋亡方面的另外一個(gè)優(yōu)勢在于它可以將凋亡和壞死區(qū)別開來［10］。

3FCM分析神經(jīng)系統(tǒng)疾病

FCM技術(shù)在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的應(yīng)用主要是分析腦脊液中T淋巴細(xì)胞及其亞群，根據(jù)腦脊液中的T淋巴細(xì)胞亞群不同來進(jìn)行疾病診斷和治療。在分析神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病方面，F(xiàn)CM技術(shù)比常規(guī)的腦脊液檢測具有更高的敏感性，并可同時(shí)分析出腦脊液免疫狀況，對神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病病情的了解和監(jiān)測具有一定的臨床意義［17］。

4FCM檢測冠心病患者

血清P選擇素水平可早期反映冠狀動(dòng)脈損傷事件，因其與Gensini冠狀動(dòng)脈病變評(píng)分呈正相關(guān)，也可用于檢測冠心病病情及預(yù)后判斷。在檢測冠心病患者方面，F(xiàn)CM與其他技術(shù)相比的優(yōu)勢也在于它的敏感性，其敏感度為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的25倍［18］。

5FCM在精液檢測中的應(yīng)用

主要是通過對不同時(shí)期的細(xì)胞數(shù)據(jù)和精子的各種指標(biāo)進(jìn)行分析，為臨床診斷精子發(fā)生障礙的性質(zhì)、原因和程度提供客觀的數(shù)據(jù)支持，對無、少及弱精子等的判斷、治療及治療效果進(jìn)行評(píng)估［19］。