前言：想要寫出一篇令人眼前一亮的文章嗎？我們特意為您整理了5篇法治心得報(bào)告范文，相信會為您的寫作帶來幫助，發(fā)現(xiàn)更多的寫作思路和靈感。

法治心得報(bào)告范文第1篇

目前高校校報(bào)的發(fā)展困境

1.出版周期長，時效性不強(qiáng)

目前，高校校報(bào)的出版周期普遍較長，有月報(bào)，也有半月報(bào)，周報(bào)、旬報(bào)還相對較少，以半月報(bào)居多。這與各高校黨委宣傳部（新聞中心、校報(bào)編輯部）的人員配置、工作內(nèi)容和工作量有密切關(guān)系。有的高校宣傳部工作人員忙于日常工作，能夠維持校報(bào)的正常出版已經(jīng)實(shí)屬不易，更別說提高出版周期和出版頻率。所以，高校校報(bào)的時效性自然不強(qiáng)，空有“新聞紙”漂亮的“外衣”，新聞不“新”也就不足為怪了。這直接導(dǎo)致讀者對高校校報(bào)的閱讀興趣下降，影響了高校校報(bào)的“生命”。

在媒體融合的大環(huán)境下，高校校園網(wǎng)絡(luò)、電視臺、手機(jī)報(bào)等媒體不斷完善和發(fā)展，與校報(bào)爭奪新聞報(bào)道資源和主動權(quán)，“瓜分”了校報(bào)的讀者群體，降低了讀者對校報(bào)的依賴程度，削弱了校報(bào)的功能。

2.校報(bào)信息量有限，師生不愛看

校報(bào)主要報(bào)道與學(xué)校有關(guān)的新聞，而不是與學(xué)校沒有任何關(guān)系的校外社會新聞。這樣的定位決定了校報(bào)的報(bào)道面比較狹窄。打開各高校的校報(bào)，版面上無不充斥著各種會議、活動新聞，鮮有社會上的新聞。雖然，目前有些校報(bào)開辟了專欄對近期社會熱點(diǎn)事情進(jìn)行摘編報(bào)道；也有的校報(bào)會對社會熱點(diǎn)事件作及時報(bào)道。但是，從各高校校報(bào)的整體情況來看，這些信息量還很有限，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足讀者的需求。

同時，高校校報(bào)上報(bào)道的新聞，大部分是硬新聞，少有貼近師生、貼近學(xué)習(xí)工作生活、貼近實(shí)際的報(bào)道，報(bào)道的思想性不夠、報(bào)道的深度和廣度有限。人們接觸媒體的目的是為了滿足他們的特定需求，這些需求具有一定的社會和個人心理因素。由于種種因素交雜在一起，使得高校校報(bào)不能夠滿足用戶的需求，使得廣大師生不愛看高校校報(bào)。

3.新媒體改變了人們的閱讀習(xí)慣，高校校報(bào)功能減弱

如今，人們通過各種新媒體獲取信息，改變了人們傳統(tǒng)的閱讀習(xí)慣，人們不再主要通過傳統(tǒng)的紙質(zhì)媒體獲取信息，已成為大勢所趨。高校校報(bào)作為傳統(tǒng)媒體，要借助新的平臺找出突圍的路徑，加強(qiáng)高校校報(bào)的功能，已成為“箭在弦上”的要求了。

高校校報(bào)要適應(yīng)新媒體發(fā)展的形勢，與時俱進(jìn)，發(fā)揮自身特有的優(yōu)勢，加強(qiáng)與新媒體的融合，優(yōu)勢互補(bǔ)，重點(diǎn)突出，特色鮮明，繼續(xù)打造高校強(qiáng)勢媒體，為學(xué)校的建設(shè)、發(fā)展鼓與呼。

微博“破解”高校校報(bào)困境的優(yōu)勢

微博由于進(jìn)入門檻較低，具有即時、互動、簡潔、方便、快捷的優(yōu)勢，迎合了碎片化、移動化、自傳播化的互聯(lián)網(wǎng)文化需求，相較報(bào)紙、電視、廣播等傳統(tǒng)媒體平臺更能得到人們的青睞。高校校報(bào)借助微博這個平臺，充分利用自身資源豐富的優(yōu)勢，“借力”微博的各種優(yōu)勢，可以實(shí)現(xiàn)校園新聞報(bào)道的及時、互動、裂變式傳播，從而為校報(bào)殺出困境“破題”，實(shí)現(xiàn)新的發(fā)展。

1.信息及時

微博最為顯著的一個特點(diǎn)是：篇幅短小，內(nèi)容簡潔。一般情況下，字?jǐn)?shù)一般不超過140個字。高校校報(bào)微博采編人員在結(jié)束新聞活動時，在現(xiàn)場便可提煉出精彩、鮮活的新聞信息，第一時間通過高校校報(bào)官方微博出去，讓人們可以第一時間獲取學(xué)校發(fā)生的事情。高校校報(bào)微博平臺的使用者新聞信息不受時空的限制，不一定要通過電腦才能實(shí)現(xiàn)，還可以通過手機(jī)、掌上電腦等移動終端完成新聞信息的傳播。

2.互動性強(qiáng)

微博用戶可以對自己感興趣的微博用戶進(jìn)行關(guān)注，所關(guān)注的微博上的信息能夠同步即時更新到本人的微博主頁，第一時間獲取信息，并可發(fā)表評論，同時微博用戶可以及時對評論作出回應(yīng)。2012年7月5日，“華南師大報(bào)”微博了一條“華師成立新學(xué)院”的消息，到7月10日，便被轉(zhuǎn)發(fā)196次，評論26條，不同的觀點(diǎn)在交鋒中碰撞。評論及回復(fù)，整個環(huán)節(jié)在一兩分鐘甚至更短時間內(nèi)即可搞定，方便快捷。

相較于報(bào)紙、電視、廣播等傳統(tǒng)媒體，媒體與讀者之間的互動性較弱，甚至沒有互動，僅僅是一種灌輸式的單向傳播。微博則可以實(shí)現(xiàn)快速的回應(yīng)，互動性很強(qiáng)，傳播及反饋的效果更好。高校校報(bào)應(yīng)該充分利用微博平臺的這些優(yōu)勢，充分利用這個平臺征求意見、想法，及時與讀者進(jìn)行互動交流，了解讀者的想法需求，從而更好地指導(dǎo)高校校報(bào)的策劃、出版、發(fā)行，使高校校報(bào)更加貼近讀者。

3.“裂變式”傳播

微博的傳播方式類似于核能的“裂變”模式，它實(shí)現(xiàn)了以一帶多、以多帶更多，最大化地裂變式擴(kuò)散。微博上的信息，通過眾多“粉絲”關(guān)注轉(zhuǎn)發(fā)，“粉絲”的“粉絲”再進(jìn)一步擴(kuò)散……如此“增力”，最終匯成強(qiáng)大的網(wǎng)絡(luò)輿論力量。

微博憑借自己的優(yōu)勢，使得眾多網(wǎng)友的觀點(diǎn)傳播效果更強(qiáng)，傳播范圍更廣；微博使得普通民眾的參與度更高，信息傳輸速度也更快。高校校報(bào)微博平臺要結(jié)合自身的實(shí)際情況，充分利用微博的這一優(yōu)勢為己所用，使之發(fā)出來的信息更具號召力，更具影響力，達(dá)到“微中見威”的效果。

高校校報(bào)微博化的發(fā)展趨勢

當(dāng)下，微博在中國生機(jī)勃勃，煥發(fā)出強(qiáng)大的能量。微博不斷滲透到各行各業(yè)，可謂風(fēng)起云涌。在這樣的環(huán)境影響下，越來越多的高校校報(bào)開通官方微博，以期在此平臺上得到源頭活水，激活高校校報(bào)自身的活力。

然后，到目前為止，高校校報(bào)的微博平臺難有類似名人微博那樣強(qiáng)大的號召力。高校校報(bào)微博還處于發(fā)展探索中，全國高校校報(bào)的官方微博數(shù)量還不多，已開通的校報(bào)官方微博，管理還有待加強(qiáng)，影響力還有待提升。高校校報(bào)微博的發(fā)展任重而道遠(yuǎn)，需要高校校報(bào)人共同努力，走出一條高校校報(bào)和微博相互結(jié)合的新路子，創(chuàng)新高校校報(bào)報(bào)道的新方式。

參考文獻(xiàn)：

①黃淑敏：《高校官方微博發(fā)展及運(yùn)營策略研究》[J]，《中國遠(yuǎn)程教育》，2012年第1期

②李良榮：《新聞學(xué)概論》[M]，復(fù)旦大學(xué)出版社，2006年版，第23頁

法治心得報(bào)告范文第2篇

這次的法制報(bào)告會使我受益匪淺。

法律，是人類文明的一種表現(xiàn)，如今，法律已經(jīng)滲透到我們的生活中，掌握一些法律的知識是很有必要的。

如果我們在生活中不懂得一些有關(guān)法律的知識，甚至漠視法律的存在，對我們是及其不利的。在我們的生活中就有不少這樣的例子。因?yàn)閷Ψ傻闹R缺少了解，受到某些誘惑，竟然鋌而走險(xiǎn)，走向違法犯罪的深淵。這些教訓(xùn)太可怕了，不僅毀了自己的一生，讓人生留下遺憾，還帶給我們身邊的親人無限的悲傷與痛苦。

所以，我們應(yīng)當(dāng)掌握一些法律知識。

法律是當(dāng)今社會一把銳利的武器，當(dāng)我們的合法權(quán)益受到侵害時，要勇敢地拿起法律武器，保護(hù)自己的合法權(quán)益。

法治心得報(bào)告范文第3篇

【關(guān)鍵詞】 辛伐他汀;不良反應(yīng);防治

Adverse reactions and prevention of Simvastatin

WANG li-ping.Department of Pharmacy. The people’s hospital of xiayi, henan 476400,China

【Abstract】 Objective To observe the adverse effects of simvastatin and control. Methods A retrospective analysis of 35 cases of adverse reactions occurred in patients with clinical data. Results Sindeh statins major adverse reactions were the nervous system, hepatobiliary system, skin and renal function impairment, etc., and the adverse reactions and dose-dependent.Conclusion Choose the right people,dosage,medication during the attention to monitoring CPK and liver and kidney function,can be safe and effective clinicai application.

【Key words】 Simvastatin;Sdverse reaction;Control

作者單位:476400河南省夏邑縣人民醫(yī)院藥房

近年來我國冠心病發(fā)病率呈增加趨勢,而冠心病是心血管疾病導(dǎo)致死亡的最主要原因,高脂血癥與冠心病的關(guān)系愈來愈受到重視。他汀類藥物能有效地降低血中膽固醇水平,控制冠心病發(fā)病率,對患者的健康極為重要。目前我國用于臨床的降脂藥物有普伐他汀,洛伐他汀,辛伐他汀等。 最新研究結(jié)果表明,長期使用他汀類藥能通過消炎減少心血管疾病的發(fā)生,而辛伐他汀尤能用于多種疾病的治療[1]。從2005年3月到2009年4月夏邑縣人民醫(yī)院服用辛伐他汀發(fā)生不良反應(yīng)共有35例,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本組 35例不良反應(yīng)病例中,男19例,女16 例。年齡最小的8歲,最大的 82歲,平均(64±15 )歲,其中1～20歲3例,21～40歲6例,41～60歲8例,>60歲18例,在35例患者中,平均每天用量為40 mg的病例有10 例,20 mg 的病例有19 例,10 mg的病例有5例,5 mg的病例有1例。

1.2 不良反應(yīng)發(fā)生時間 不良反應(yīng)發(fā)生最短的時間是在用藥后 3 h,最長9個月,平均22 d;大多數(shù)病例在用藥的當(dāng)天即發(fā)生不良反應(yīng)。

1.3 不良反應(yīng)累及多個器官系統(tǒng),主要集中在神經(jīng)肌肉系統(tǒng)、肝膽系統(tǒng)和皮膚及其附件系統(tǒng)。具體表現(xiàn)及分類見表2。

表1

不良反應(yīng)類型和構(gòu)成比(例,%)

分類構(gòu)成比(%)

神經(jīng)肌肉系統(tǒng)10(28.6)

肝膽系統(tǒng) 9(25.7)

皮膚及其附件 8(22.9)

胃腸道系統(tǒng) 3(8.6)

呼吸系統(tǒng)2(5.7)

其他 3(8.6)

1.4 典型病例

患者女,68歲。因高血脂癥給予他汀類藥物10 mg口服, 第 1次服藥后4 h,患者出現(xiàn)頭痛、全身不適等癥狀,服藥后約 8 h出現(xiàn)腓腸肌疼痛,以右小腿為重,下地行走困難,急查肌酸激酶(CK)為 500 U/L,立即停藥,3 d后肌痛和頭痛逐漸好轉(zhuǎn)。復(fù)查CK為 3O U/L。建議服用他汀類藥物時應(yīng)常規(guī)檢測CK,當(dāng)CK值超過正常上限10倍時,必須立即停藥。

2 討論

他汀類藥物是羥甲基戊二酰輔酶A( HMG-CoA) 還原酶抑制劑[2],主要是通過抑制肝臟合成膽固醇的限速酶(HMG-CoA還原酶)的活性,促進(jìn)肝內(nèi)膽固醇合成減少,而肝內(nèi)膽固醇的下降可解除對低密度脂蛋白(LDL)受體基因的抑制,使肝內(nèi) LDL受體合成增加,從而使血漿中的 LDL被肝臟攝取而清除,這類藥物降膽固醇(TC) 作用最強(qiáng),同時也能降三酰甘油(TG)和升高高密度脂蛋白(HDL)。因此具有降脂、促成骨細(xì)胞分化、抗炎及抗平滑肌細(xì)胞增殖、內(nèi)皮細(xì)胞活性與功能修復(fù)、 抗血栓與血液流變學(xué)改善等作用。被廣泛應(yīng)用于治療高血脂癥、 冠心病合并高血脂癥、糖尿病、頸總動脈粥樣硬化等,辛伐他汀一般耐受性良好,但經(jīng)常有不良反應(yīng)的報(bào)道[3],其發(fā)生機(jī)制可能為 ①他汀類藥物作用于線粒體某些環(huán)節(jié),使甲一羥戌酸鹽缺乏,因而細(xì)胞合成輔酶Q10發(fā)生障礙,能量受到抑制,導(dǎo)致細(xì)胞能量耗竭死亡; ②他汀類藥物可能減少法呢醇及異戌二烯合成,而法呢醇與異戊二烯是合成某些蛋白質(zhì)的必須物質(zhì);③他汀類藥物可能引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加而引起細(xì)胞死亡;④他汀類藥物使膽固醇的合成減少導(dǎo)致 細(xì)胞膜的通透性及不穩(wěn)定性增加;⑤他汀類藥物通過細(xì)胞色素P450同工酶,進(jìn)行代謝,故應(yīng)避免使用抑制細(xì)胞色素P450代謝途徑的藥物與他汀類藥物合作,使肌肉毒性明顯增加。

橫紋肌溶解的易發(fā)生人群為服用劑量過大者,老年人(尤其是體形瘦小、虛弱的老年女性和80歲以上者),多系統(tǒng)疾病的老年患者,慢性腎功能不全患者,糖尿病患者,多種藥物并用患者,服用他汀類藥物的同時又進(jìn)行大手術(shù)患者,飲用大量葡萄柚汁或酗酒的患者等[4]。在使用辛伐他汀治療過程中發(fā)現(xiàn)以下不良反應(yīng)跡象應(yīng)減少劑量或停藥:播散性肌痛、肌肉觸痛、肌無力、CK顯著升高(正常值的 l0倍以上) 或 CK呈進(jìn)行性升高;腎功能損害、尿液顏色改變( 非血尿);血清氨基轉(zhuǎn)移酶升高達(dá)正常值的 3倍以上。

因此,臨床醫(yī)生在用藥時要嚴(yán)格注意以下用藥注意事項(xiàng): 對于老年患者在老年患者( >65歲) 服用辛伐他汀的臨床對照實(shí)驗(yàn)中,其降低 TC、LDL的效果與其他人群的效果相同,而不良反應(yīng)和實(shí)驗(yàn)室檢查值異常的發(fā)生率亦無明顯增大。所以,老年患者可以使用.對于孕婦,膽固醇及其生物合成途徑的其他產(chǎn)物是胎兒發(fā)育的必需成分。辛伐他汀能降低膽固醇的合成,也會影響膽固醇生物合成途徑的其他產(chǎn)物,就會影響胎兒的發(fā)育。所以婦女一旦發(fā)現(xiàn)懷孕,就應(yīng)立即停藥,而孕婦應(yīng)禁用該藥[5]; 飲食影響,葡萄柚汁為肝藥酶抑制劑,可使辛伐他汀平均血藥濃度升高,加重辛伐他汀的不良反應(yīng)。所以,在服用辛伐他汀期間應(yīng)慎飲葡萄柚汁;用藥期監(jiān)測肌酸磷酸激酶( CPK) 和肝、腎功能 在用藥期間,無論有無肌痛、乏力癥狀,均應(yīng)監(jiān)測 CPK水平和肝腎功能,以預(yù)防骨骼肌受損和肝、腎損害的發(fā)生。

辛伐他汀禁用或慎用于下列患者對于防止不良反應(yīng)的發(fā)生具有重要意義:對他汀類藥物過敏或過敏體質(zhì)患者:有肝病史或酗酒史的患者;治療前已是活動性肝炎或已有無法解釋的血清氨基轉(zhuǎn)移酶升高的患者;需要應(yīng)用吉非貝齊、煙酸、紅霉素、胺碘酮、氟康唑、克拉霉素、利托那韋、環(huán)孢素等藥物治療的患者,因?yàn)榕c這些藥物合用可增加橫紋肌溶解的發(fā)生率。

辛伐他汀所致的輕微不良反應(yīng)如胃腸反應(yīng)一般無須停藥,可以繼續(xù)治療;但出現(xiàn)其他不良反應(yīng)則應(yīng)停用辛伐他汀,特別是出現(xiàn)橫紋肌溶解的早期臨床表現(xiàn)如肌肉疼痛、觸痛、肌無力、關(guān)節(jié)痛、CK顯著升高時應(yīng)立即停藥,否則會出現(xiàn)嚴(yán)重 的肌纖維溶解而導(dǎo)致肌紅蛋白尿和急性腎壞死。 辛伐他汀引起的橫紋肌溶解的主要治療措施為水化和堿化尿液、預(yù)防腎功能衰竭,必要時可進(jìn)行 血液透析。其他不 良反應(yīng)只要對癥治療(神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)及肝損害等)或停藥( 如多尿、功能障礙等)即可。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 丁既鵬.辛伐他汀調(diào)血脂作用和不良反應(yīng)的臨床研究.臨床薈萃,2004,19(12):703-704.

[2] 周穎,袁新婷,魯云蘭.辛伐他汀的不良反應(yīng)及安全用藥.藥物不良反應(yīng)雜志,2002,4(5):306.

[3] 熊金輝,雷招寶,肖濤.辛伐他汀的不良反應(yīng)及其防治.藥物不良反應(yīng)雜志,2006,8(2):113-116.

法治心得報(bào)告范文第4篇

【摘要】 目的 觀察具有抗炎活性的辛伐他汀對脂多糖 (LPS) 誘導(dǎo)的肺泡上皮細(xì)胞A549黏蛋白表達(dá)的影響并探討其機(jī)制。方法 用不同濃度的辛伐他汀作用于培養(yǎng)的A549細(xì)胞，采用定量RTPCR、ELISA和明膠酶譜法分別檢測細(xì)胞的黏蛋白MUC5AC mRNA表達(dá)水平、MUC5AC蛋白含量及細(xì)胞上清基質(zhì)金屬蛋白酶 (MMP)9活性。結(jié)果 辛伐他汀組細(xì)胞中MUC5AC蛋白含量及MUC5AC mRNA水平較脂多糖組均明顯下降(P

【關(guān)鍵詞】 辛伐他汀;脂多糖;黏蛋白;肺泡上皮細(xì)胞

黏液高分泌是包括慢性阻塞性肺疾病(COPD)、哮喘等在內(nèi)的慢性氣道炎癥性疾病重要病理生理特征。過度分泌的黏液因其可加重氣流阻塞并作為細(xì)菌定植和生長的培養(yǎng)基，導(dǎo)致抗生素效能下降，而成為影響疾病死亡率的一項(xiàng)獨(dú)立危險(xiǎn)因素〔1〕。細(xì)菌感染可促進(jìn)黏液高分泌，即臨床所說的痰液增多，甚至痰栓形成，其中革蘭陰性桿菌的重要毒力因子脂多糖(LPS)是強(qiáng)效促黏液分泌劑。在本研究中，體外黏液高分泌模型的建立是通過LPS刺激具有表達(dá)黏蛋白能力的肺泡上皮細(xì)胞A549。氣道黏液的黏彈性主要取決于由黏膜下腺體的黏液腺細(xì)胞和氣道上皮的杯狀細(xì)胞合成的高度糖苷化蛋白質(zhì)的黏蛋白(MUC)。現(xiàn)已證實(shí)MUC5AC是慢性炎癥時呼吸道黏液所呈現(xiàn)的主要MUC表型〔2〕。研究表明，他汀類降脂藥具有抗炎作用，并對病毒性肝炎、腎炎等疾病具有治療作用。本研究通過LPS誘導(dǎo)A549細(xì)胞建立體外黏液分泌模型，旨在初步探索辛伐他汀對氣道黏液分泌的影響及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料 肺泡上皮細(xì)胞株A549由本實(shí)驗(yàn)室保存。辛伐他汀購自杭州默沙東制藥公司;LPS、明膠、噻唑藍(lán) (MTT)、Tripure購自美國Sigma公司;胰蛋白、RPMI1640購自美國Gibco公司;胎牛血清購自杭州四季青公司;小鼠MUC5AC單克隆抗體購自Chemicon公司;基質(zhì)金屬蛋白酶明膠酶譜法電泳分析試劑盒為上海GeneMed Scientifics公司產(chǎn)品;TaqDNA聚合酶為美國Promega公司產(chǎn)品;PCR試劑盒為大連寶生物工程公司產(chǎn)品;cDNA第一條鏈合成試劑盒購自上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) A549細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10%滅活的胎牛血清，并加入1%L谷氨酰胺及1%青霉素和鏈霉素的RPMI1640培養(yǎng)液中，放置于37℃、5%CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中孵育;當(dāng)細(xì)胞融合達(dá)70%～90%時，換用無血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24 h。

1.3 藥物處理〔3〕 辛伐他汀按16 mg/ml溶于0.06 mol/L NaOH和40%乙醇，于50℃加熱2 h，用HCl調(diào)整溶液pH至7.2，加入等體積的蒸餾水，使其濃度為40 μmol/L，凍存于-20℃?zhèn)溆谩２捎肕TT比色法檢測實(shí)驗(yàn)濃度辛伐他汀對細(xì)胞活力影響，酶聯(lián)免疫檢測儀于570 nm波長測定各孔吸光度值(A)。計(jì)算細(xì)胞活力：細(xì)胞存活率=實(shí)驗(yàn)組A值/陰性對照組A值×100%，每實(shí)驗(yàn)組設(shè)8個復(fù)孔，取均值。

1.4 分組 細(xì)胞隨機(jī)分為對照組 (無血清培養(yǎng)基培養(yǎng))、LPS組(無血清培養(yǎng)基中加入10 μg/ml LPS)、辛伐他汀組 (無血清培養(yǎng)基中加入30 μmol/L辛伐他汀)、LPS+20 μmol/L辛伐他汀組 (先于無血清培養(yǎng)基中加入20 μmol/L辛伐他汀孵育30 min后，再給予同樣濃度LPS)、LPS+30 μmol/L辛伐他汀組 (先于無血清培養(yǎng)基中加入30 μmol/L辛伐他汀孵育30 min后，再給予同濃度LPS)，各組均培養(yǎng)24 h后行指標(biāo)檢測。

1.5 熒光定量RTPCR檢測細(xì)胞MUC5AC mRNA表達(dá) 提取細(xì)胞總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再行定量PCR。引物由上海Genebase生物公司合成。MUC5AC上游引物序列為5′TCCTTCTTGTCAATGGTGTCT3′;下游為5′ACCAGGTTCAGGACAAGTAG3′;GAPDH上游引物序列為5′CCTCAAGATTGTCAGCAAT3′;下游為5′CCATCCACAGTCTTCTGAGT3′。根據(jù)目的基因MUC5AC與管家基因GAPDH的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將提取的RNA樣品進(jìn)行定量，PCR反應(yīng)條件是預(yù)變性：94℃×2 min;再94℃ 25 s，50℃ 30 s，72℃ 40 s共40個循環(huán);最后72 ℃延伸5 min。將檢測熒光強(qiáng)度的時相設(shè)定在擴(kuò)增反應(yīng)的退火期 (50 ℃ 30 s)，讀取樣品擴(kuò)增達(dá)到所設(shè)閾值的反應(yīng)循環(huán)數(shù)Ct值，Ct=Ct(目的基因待測樣品GADPH待測樣品)Ct(校正樣品GADPH校正樣品)，計(jì)算得到MUC5AC相對于GAPDH的定量。

1.6 ELISA法檢測細(xì)胞裂解上清液中MUC5AC蛋白含量 提取細(xì)胞內(nèi)蛋白，行總蛋白定量，取各組樣本測定總蛋白量后用裂解液調(diào)整蛋白濃度使各樣本一致，并用0.01% PBS稀釋蛋白樣本。采用ELISA方法測定MUC5AC蛋白含量。

1.7 明膠酶譜法檢測細(xì)胞上清液中基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)活性 收集各組細(xì)胞上清液，于4℃，2 000 r/min，離心5 min去細(xì)胞碎片，將上清置于70℃凍存?zhèn)溆谩Ｎ?0 μl條件培養(yǎng)液于1.5 ml EP管，加入上樣液，混勻，室溫下靜置10 min;取20 μl樣品于含明膠的10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳1～2 h，置已完成的凝膠于10 ml 2.5% TritonX100溶液中浸泡低速振搖1 h，于明膠酶緩沖液中37℃孵育18～24 h，用0.5%考馬斯亮藍(lán)染色，加入10%乙酸、40%甲醇混勻，脫色至白色條帶與藍(lán)色背景對比清晰即可。凝膠掃描、照相、使用Scion Image 4.0.2β圖像分析軟件測定白色條帶的光密度值(OD)，計(jì)算各組MMP9相對活性。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)均以x±s表示，使用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS 10.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，兩兩比較采用方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 辛伐他汀對A549細(xì)胞MUC5AC mRNA表達(dá)的影響 兩種實(shí)驗(yàn)濃度的辛伐他汀對細(xì)胞活力影響小，電鏡下觀察細(xì)胞無明顯改變，細(xì)胞貼壁能力好。無LPS刺激時A549細(xì)胞即有MUC5AC mRNA的表達(dá)，而LPS刺激后細(xì)胞中MUC5AC mRNA的表達(dá)明顯增加(P

2.2 辛伐他汀對A549細(xì)胞MUC5AC蛋白表達(dá)的影響 LPS刺激后，細(xì)胞MUC5AC蛋白相對含量 (以MUC5AC/總蛋白表示) 較對照組明顯升高(P

2.3 辛伐他汀對A549細(xì)胞MMP9活性的影響 凝膠中的明膠能被MMP9分解，因此在考馬斯亮藍(lán)染色后，在藍(lán)色背景下于92 kD分子量處出現(xiàn)白色負(fù)染色條帶。正常情況下A549細(xì)胞在沒有外界刺激下幾乎不表達(dá)MMP9活性。LPS刺激后細(xì)胞上清液中MMP9活性明顯增加(P

3 討 論

黏蛋白決定黏液的理化性質(zhì)，多種內(nèi)外因素能通過多種機(jī)制誘導(dǎo)其合成和分泌增加，導(dǎo)致黏液高分泌，其中LPS是強(qiáng)有力促分泌因子〔4〕，本研究也顯示LPS刺激后A549細(xì)胞黏蛋白MUC5A mRNA和蛋白水平均明顯升高，體外黏液高分泌模型建立成功。

他汀類藥物臨床上主要用于各種原因引起的高脂血癥、動脈粥樣硬化和冠心病防治。而他汀類藥物除了降脂作用外，還具有抗炎作用。MMP9是炎癥時最主要的基質(zhì)金屬蛋白酶，也是呼吸系統(tǒng)疾病中主要的MMP，其活性增強(qiáng)，可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，而慢性氣道炎癥性疾病最重要的病理特征是氣道結(jié)構(gòu)重建，主要表現(xiàn)為黏液腺上皮化生和細(xì)胞外基質(zhì)的改變〔5〕。在臨床上，細(xì)菌感染是慢性氣道炎癥性疾病患者急性加重的最常見誘因，其中革蘭氏陰性菌因其所致的感染常導(dǎo)致患者痰液增多，黏稠及抗生素高耐藥性，而成為人們關(guān)注及研究的對象，LPS是重要毒力因子，它可使細(xì)胞MMP9活性增強(qiáng)〔6〕。本研究中，A549細(xì)胞在沒有任何處理下幾乎不表現(xiàn)出MMP9活性;予LPS刺激后，細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP9活性顯著增加。MMP9活性增加導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)的破壞，從而參與氣道結(jié)構(gòu)重建，引發(fā)了慢性炎癥疾病局部氣道包括黏液高分泌在內(nèi)的后續(xù)一系列病理生理改變，從某種意義上說MMP9啟動了氣道炎癥級聯(lián)反應(yīng)。大量心血管疾病方面研究證實(shí)MMP9在動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制中擔(dān)當(dāng)重要角色，而他汀類藥物可通過抑制MMP9活性來發(fā)揮其在動脈粥樣硬化治療中的非降脂作用〔7〕。本研究提示辛伐他汀可下調(diào)MUC5AC表達(dá)，其機(jī)制可能與抑制MMP9活性有關(guān)。多種刺激因子可通過不同的信號傳導(dǎo)途徑激活MMP9，而LPS可能是通過激活絲裂原活化蛋白激酶Ras/p38MAPK信號通路來影響MMP9活化，辛伐他汀作為膽固醇代謝限速酶抑制劑可調(diào)節(jié)膽固醇合成過程中間代謝產(chǎn)物，后者參與了重要信號蛋白Ras的合成，從而影響MMP9活性。

綜上，辛伐他汀可在轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平上減少LPS誘導(dǎo)的A549細(xì)胞黏蛋白MUC5AC蛋白過度表達(dá)，此作用可能通過調(diào)控MMP9活性實(shí)現(xiàn)，正因?yàn)楹笳呋钚韵陆?，對?xì)胞外基質(zhì)破壞減少，使氣道炎癥反應(yīng)局限在適當(dāng)范圍，從而影響了由多種炎癥機(jī)制參與的黏液高分泌。因此辛伐他汀的抗炎能力可能在抑制慢性炎癥性疾病氣道黏液高分泌方面發(fā)揮積極作用，同時鑒于他汀類藥物作用的多效性，其分子水平的具體機(jī)制還有待更深入的研究。

參考文獻(xiàn)

1 Shale DJ，Inonescu AA.Mucus hypersecretion：a common symptom，a common mechanism〔J〕? Eur Respir J，2004;23(6)：7978.

2 Rose MC，Voynow JA.Respiratory tract mucin genes and mucin glycoproteins in health and disease〔J〕.Physiological Rev，2006;86(1)：24578.

3 Mc Kay A，Leung BP，Mc Innes IB，et al.A novel antiinflammatory role of simvastatin in a murine model of allergic asthma〔J〕.Immunol，2004;172(5)：29038.

4 Smirnova MG，Guo L，Birchall JP，et al.LPS upregulates mucin and cytokine mRNA expression and stimulates mucin and cytokine secretion in goblet cells〔J〕.Cell Immunol，2003;221(1)：429.

5 Jeffery PK.Remodeling and inflammation of bronchi in asthma and chronic obstructive pulmonary disease〔J〕.Proc ATS，2004;1(3)：17683.

法治心得報(bào)告范文第5篇

Abstract： Camellia oil is a kind of natural vegetable oil that is difficult to get oxidative deterioration. It is rich in unsaturated fatty acid， the oleic acid of it is easily absorbed by the hair， skin. It is the most suitable oil for cosmetic. In order to achieve better moisturizing effect， graded refrigerated centrifugation is used to centrifugalize the camellia oil to improve the unsaturated fatty acid content in camellia oil. Gas chromatography is used for the camellia oil after separation to test the fatty acid to determine the process conditions of graded refrigerated centrifugation.

關(guān)鍵詞：梯度冷凍離心；分離；不飽和脂肪酸

Key words： graded refrigerated centrifugation；separation；unsaturated fatty acid

中圖分類號：TL25+2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1006-4311（2016）01-0163-02

0 引言

油茶種植在我國有悠久的歷史，我國在南宋年間就有種植，營養(yǎng)豐富的山茶油除了能供人們在餐桌上食用外，在我國的許多古代醫(yī)書中也記載了茶油的醫(yī)療功效?！掇r(nóng)政全書》有療痔瘡?fù)藵駸幔粡埶捎凶灾泣S連清茶油，可有效治療過敏性皮膚病及皮膚感染。劉添榮等人發(fā)現(xiàn)外涂復(fù)方山茶油能夠大大縮短潰瘍愈合時間，有效治療口腔潰瘍。遠(yuǎn)在三四千年之前，我國古代人民就開始使用植物油脂了，認(rèn)為其具有美容、潤膚的作用。關(guān)于植物油脂的此項(xiàng)功能在我國很多藝書中都有記載，比如《本草拾遺》、《本草綱目》、《黃帝內(nèi)經(jīng)》等。我國古代婦女護(hù)發(fā)時通常會使用茶油 ?！峨S之居飲食譜》中對茶油的描述是這樣的，“茶油烹調(diào)肴撰，日用皆宜，蒸熟食之，澤發(fā)生光、諸油唯此最為輕清，故諸病不忌”，由此可知，我國古人對茶油非常青睞，認(rèn)為其不僅可以養(yǎng)顏美容，還能夠延年益壽。植物油脂主要由脂肪酸甘油酯組成，油脂在化妝品中的應(yīng)用由來已久，古時多是將油脂原封不動作為油相成份、臘成份用于化妝品，它是最古老同時也是應(yīng)用最廣泛的化妝品原料，其養(yǎng)顏美容功效顯著。另外，植物油脂內(nèi)還含有豐富的營養(yǎng)成分，比如礦物質(zhì)、類胡蘿卜素、維生素以及不飽和脂肪酸等。茶油的脂肪酸相對含量：油酸為74～87%，亞油酸為7～14%，飽和脂肪酸為7～11%；茶油中富含的不飽和脂肪酸（油酸、亞油酸）對人體的皮膚有保水、潤膚、護(hù)膚的功能，不僅如此，不飽和脂肪酸還具有護(hù)發(fā)、防曬、抗皮膚老化等功能，茶油之所以是化妝品最常用的原材料，也正因?yàn)槠鋬?nèi)含有豐富的不飽和脂肪酸。當(dāng)今世界流行回歸大自然的思潮，利用天然茶油里的不飽和脂肪酸來護(hù)理人體皮膚是化妝品行業(yè)的一個趨勢，為了提高茶油里的不飽和脂肪酸含量，對茶油進(jìn)行分提。目前國內(nèi)采用的低溫分離方法有低溫結(jié)晶法，該方法的原理是利用低溫下不同脂肪酸或脂肪鹽酸在有機(jī)溶劑中的溶解度不同來實(shí)現(xiàn)分離的。通常在有機(jī)溶劑中，脂肪酸的溶解度會隨著碳鏈長度的變化而變化，兩者是反比的關(guān)系，且隨著雙鍵數(shù)的變化也會變化，兩者是正比的關(guān)系。上述特征在低溫條件下更為明顯，因此，要想獲得所需的多價(jià)不飽和脂肪酸，只需以丙酮和乙醇為有機(jī)溶劑，在有機(jī)溶劑內(nèi)混入脂肪酸，然后對其進(jìn)行降溫處理，就可以將多價(jià)不飽和脂肪酸從眾多的脂肪酸中分離出來。該工藝方法具有操作方便、原理簡單等優(yōu)勢，但同時也存在分離效率低、必須回收大量有機(jī)溶劑等弊端。本文采用梯度冷凍離心分離法，避免了要回收大量的有機(jī)溶劑，且獲得了更好的分離效果。

1 主要材料與設(shè)備

①山茶油由浙江景寧畬之坊油茶開發(fā)有限公司提供。

②設(shè)備 高速冷凍離心機(jī)（上海天美生化儀器設(shè)備工程有限公司），低溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司），7890氣相色譜儀（Agilent公司）等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 實(shí)驗(yàn)原理 由于混合脂肪酸中各項(xiàng)成分的物理性質(zhì)相似，在這種情況下，采用傳統(tǒng)的分離方法難以實(shí)現(xiàn)真正分離。但如果將特定結(jié)晶劑加入到混合脂肪酸中去，那么不同結(jié)構(gòu)的脂肪酸就會形成結(jié)晶核。其中，由于不飽和脂肪酸配合物的熱穩(wěn)定性比飽和脂肪酸配合物熱穩(wěn)定性要低，且隨著不飽和程度的提高不飽和脂肪酸配合物的熱穩(wěn)定性會逐漸降低，再加上結(jié)晶溫度和條件等因素的影響，就可以實(shí)現(xiàn)混合脂肪酸中不同結(jié)構(gòu)組分得以分離、富集。由此可知，我們采用結(jié)晶、梯度冷凍及冷凍離心對混合脂肪酸進(jìn)行分離是可行的。

2.2 工藝過程

2.2.1 采用氣相色譜分析法對浙江景寧畬之坊油茶開發(fā)有限公司提供的山茶油進(jìn)行檢測

①色譜條件：色譜柱：毛細(xì)管柱，30m×0.25mm×0.25μm，柱內(nèi)膜涂布50%苯基50%二甲基聚硅氧烷；檢測器：氫火焰檢測器，檢測器溫度250℃；載氣流速（氮?dú)猓?.0mL/min，空氣：300mL/min，氫氣：30mL/min；柱溫：240℃；氣化室溫度：250℃；分流比：1∶30。

②分析步驟：樣品預(yù)處理-脂肪酸甲酯的制備：稱取0.5-1.0g（精確到0.01g）樣品置于20mL具塞試管中，加入10mL正己烷溶解油脂，再加入0.5mL 2mol/L氫氧化鉀-甲醇溶液，搖勻，靜置30分鐘澄清后，上層溶液用于氣相色譜儀測定。

樣品的測定：微量進(jìn)樣器直接取0.5μL樣液進(jìn)氣相色譜儀分析，以脂肪酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)混合溶液各組分保留時間定性，直接面積歸一化法計(jì)算樣品中各脂肪酸組成的百分含量。

③測定結(jié)果：經(jīng)測定其混合脂肪酸的組成如表1所示。

2.2.2 分離處理 加入結(jié)晶劑，設(shè)置溫度梯度進(jìn)行冷卻、結(jié)晶，并在低溫結(jié)晶狀態(tài)下進(jìn)行冷凍離心分離，提高油品里不飽和脂肪酸含量。

2.3 工藝條件及參數(shù)的確定

2.3.1 溫度梯度的確定 溫度對分離效果十分重要，冷凍溫度偏高，則在液體酸中固體酸殘量多；冷凍溫度偏低，則體系易形成細(xì)軟無定形晶體使分離困難；在冷凍過程中溫度降低過快，則形成的晶體中包藏很多液體，使收率大大降低，而且分離不完全。因此采用梯度降溫，給結(jié)晶充分的養(yǎng)晶過程，使結(jié)晶中心大為減少，使其逐漸長大為較純晶體，以下選擇三個溫度梯度作對比實(shí)驗(yàn)，用上訴氣相色譜法的方法對分提后的樣品進(jìn)行檢測，其結(jié)果見表2。

從表2可以看出，通過溫度梯度-2結(jié)晶冷凍離心后測定，其不飽和脂肪酸提取率是最高的，故溫度梯度-2是最優(yōu)條件。

2.3.2 結(jié)晶劑用量的確定 選擇白土作結(jié)晶劑，在同一溫度梯度下，以加入不同結(jié)晶劑用量作實(shí)驗(yàn)，用2.2.1的方法對分提后的樣品進(jìn)行檢測，其結(jié)果見圖1和圖2。從圖1和圖2看出，增大結(jié)晶劑用量，產(chǎn)品的油酸和亞油酸含量均有所提高，但當(dāng)結(jié)晶劑用量超過0.5%后，上述兩項(xiàng)指標(biāo)會略有下降，結(jié)晶劑消耗量也過大，綜合考慮，結(jié)晶劑用量的最佳值為0.4%。

3 結(jié)論

在上述工藝條件實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，提出如圖3工藝流程。

本文確定了梯度冷凍離心分離法的工藝條件，且該方法較好的解決了低溫結(jié)晶法需要回收大量有機(jī)溶劑且分離效率不高的問題，提純分離后的山茶油可以作為潤膚用山茶油精油的原料，較高的天然不飽和脂肪酸更利于人體皮膚的吸收。

參考文獻(xiàn)：

[1]鐘海雁，王承南，謝碧霞.超臨界CO2萃取條件對油茶籽油品質(zhì)的影響[J].中國糧油學(xué)報(bào)，2001（01）.